wb实验步骤及原理？

一、wb实验步骤及原理？

WB实验的基本原理：

蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。

与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

三、WB实验步骤

(一)试剂准备

(二)蛋白样品制备

(三) 蛋白含量的测定

(四)SDS-PAGE电泳

(五)转膜

(六)免疫反应

(七)化学发光，显影，定影

(八)凝胶图象分析

二、wb实验的原理和步骤？

WB实验的基本原理：

蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。

与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

三、WB实验步骤

(一)试剂准备

(二)蛋白样品制备

(三) 蛋白含量的测定

(四)SDS-PAGE电泳

(五)转膜

(六)免疫反应

(七)化学发光，显影，定影

(八)凝胶图象分析

三、wb实验技术作用？

用来检测蛋白质含量。wb是western blot的简称，可以非常灵敏的检测出蛋白质的含量。

四、wb显色原理？

WB实验的基本原理：

　　蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法

五、wb成像原理？

EV是曝光补偿的意思，ISO是CCD的感光度，S是指快门，即速度，WB指白平衡。照相机简称相机，是一种利用光学成像原理形成影像并使用底片记录影像的设备。很多可以记录影像设备都具备照相机的特征。医学成像设备、天文观测设备等等。照相机是用于摄影的光学器械。被摄景物反射出的光线通过照相镜头（摄景物镜）和控制曝光量的快门聚焦后，被摄景物在暗箱内的感光材料上形成潜像，经冲洗处理（即显影、定影）构成永久性的影像，这种技术称为摄影术。分为一般的照相与专业的摄像。

六、wb是细胞实验还是动物实验？

1.Western Blot（简称WB）是细胞实验，蛋白质免疫印迹法，是基于蛋白质SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白的特性，通过显色技术，以达到检测目的蛋白的技术。该技术广泛应用于定性检测蛋白水平的表达，活性分析与鉴定。

2.实验原理:WB以组织或细胞中的蛋白质为研究对象，经过SDS-PAGE分离蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的一抗起免疫反应，再与酶或同位素标记的二抗起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。

七、wb实验切胶范围？

切胶范围是根据你目的条带确定。比如需要100kda大小的蛋白，就切70-130kda大小附近的胶。

八、wb转膜原理？

电场力作用条件下，带电粒子（PAGE胶中的蛋白）会发生定向迁移；

蛋白大小如果超过膜孔径（0.22μm or 0.45μm），不会透过膜；

WB用的膜具有蛋白吸附作用。

九、wb浓缩胶原理？

WB浓缩胶原理是指通过对胶原纤维进行离心和洗涤等处理，将胶原蛋白从其他杂质中分离出来，并将其浓缩至较高的浓度。具体步骤如下：1. 提取胶原：将胶原组织（如动物骨骼、皮肤等）经过机械研磨和化学处理，使胶原从组织中溶解出来。2. 离心：将胶原溶液进行离心，以去除残留的细胞碎片、细胞核和其他固体杂质。离心的速度和时间需要根据胶原的特性进行调整。3. 洗涤：将离心后的胶原沉淀用适量的缓冲液进行洗涤，以去除离心过程中的杂质和悬浮物。4. 浓缩：将洗涤后的胶原溶液进行浓缩处理，通常使用滤膜或离心浓缩等方法进行，以提高胶原的浓度。通过这些步骤，胶原蛋白可以从原始组织中提取并浓缩至较高浓度，以供后续的应用和研究。浓缩的胶原蛋白通常具有较高的纯度和生物活性，可以用于制备胶原蛋白相关的产品，如胶原膜、胶原蛋白粉等。

十、wb湿转法原理？

western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用 在western blot转膜时，PVDF膜在甲醇活化后是带电的，因而在转膜时会将蛋白吸附。

封闭的目的就是要将PVDF膜上无蛋白的部分空隙用奶粉填满，以免孵抗体的时候一抗二抗与之结合，产生非特异条带或者是背景杂乱。

所以western blot中封闭主要是起去除非特异性吸附的作用