检测方法:1、水样接种量将水样充分混匀后,根据水样污染的程度确定水样接种量;2、初发酵实验将水样分别接种到盛有乳糖蛋白胨培养液的发酵管中,产酸和产气的发酵管表明试验阳性;3、 复发酵实验轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管,培养后立即观察,若发酵管产气,则表明确信试验阳性。4、计算和报告结果。
1采样方法
随机抽取消毒后准备使用的各类食具(碗、盘、杯等),取样量可根据大、中、小不同饮食行业每次采样6~10件,每件贴纸片两张,每张纸片面积25cm2(5cm╳5cm)用无菌生理盐水湿润大肠菌群检测用纸片后,立即贴于食具内侧表面,30s后取下,置于无菌塑料袋内。
筷子以5只为一件样品,用毛细吸管吸取无菌生理盐水湿润纸片后,立即将筷子进口端约5cm)抹试纸片,每件样品抹拭两张,放入无菌塑料袋内。
2、检验方法
将已采样的纸片置37℃培养16~18h,若纸片保持紫蓝色不变或有红色斑点但斑点周围无黄晕为大肠菌群阴性,在红色斑点周围有黄晕或纸片变黄并在黄色背景上呈现红色斑点或片状红晕为阳性。
培养法:将粪便样本接种到含有大肠杆菌特异性培养基的平板上,经过一定时间后,观察菌落的形态和数量,即可判断大肠杆菌的存在和数量。
快速检测法:利用大肠杆菌特异性抗体或核酸探针,对粪便样本进行快速检测,可以在短时间内得到大肠杆菌的存在和数量。
免疫学方法:利用大肠杆菌特异性抗体或抗原,对粪便样本进行免疫学检测,可以在短时间内得到大肠杆菌的存在和数量。
PCR法:利用聚合酶链式反应技术,对粪便样本中的大肠杆菌DNA进行扩增和检测,可以在短时间内得到大肠杆菌的存在和数量。
这些方法都具有快速、准确、灵敏等特点,可以用于大规模的粪便样本检测和监测。
1 有多种。2 其中最常用的方法是培养法和PCR法。培养法是将食品样品接种在含有营养物质和指示剂的培养基上,通过观察生长情况和指示剂颜色变化来判断大肠菌群数量;PCR法则是通过检测DNA序列来确定大肠菌群的存在和数量。3 此外,还有基于光学、电化学和免疫学等原理的检测方法,不同的方法有各自的优缺点,需要根据实际情况选择合适的检测方法。
进入无菌室步骤
1.进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌,时间为0。5—1小时。
2.关灯后0•5小时后放可进入。
3.进入更衣间更换衣服,佩带口罩、帽子、鞋套
实验步骤
1,进入无菌室后,先把酒精灯点燃,然后在用酒精棉进行手部消毒。(酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成)
2,准备双料管3根,单料管6根,培养皿7个。
3,直接从原液中吸取10ml放入双料管,(3根每根各10ml)
4,再吸取原液1ml放入单料管中(3根每根各1ml)
5,再吸取原液1ml放入培养皿中(2个培养皿各1ml)
6,再吸取原液1ml放入盐水管中制成-1梯度的样液
7,更换一根吸管,从-1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中(3根每根各1ml)
8,再吸取-1梯度样液1ml放入培养皿中(2个培养皿各1ml)
9,再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允(注另作3个培养皿:空气空白,把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白,把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白,吸1ml生理盐水放入培养皿中,倒入营养琼脂平铺底部摇匀。)
10,把全部作好的放入培养箱中,温度36C+-1×C,大肠24H+-2H,菌落48H+-2H,(待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中)
11,梯度:-1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成
-2梯度为1ml-1梯度样液加入9ml生理盐水配成
-3梯度-4梯度配制方法和-1、-2梯度的配制方法一样
12,如果大肠初发酵产生气泡,用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C,24H+-2H。(接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面)
13,取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌,放入乳糖复发酵管中,然后再培养36C+-1C,24H++-2H。
14,再在伊红美兰平板之字形上挑菌,放到载玻片上作镜检。(方法见标准)
15,只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下,才能断定这根管是不合格。
16,清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌,121C,0。5小时同时不能放气
我国地表水排放标准的粪大肠菌群指标为1000个/升。国家规定“粪大肠菌群数”一级排放A标准为10³个/L,一级排放A标准为10^4个/L,二级排放标准为10^4个/L.三级不做规定。
总大肠菌群:乳糖蛋白胨36du正负一度下24小时培养24小时正负2小时,能够产3产7的G-杆菌,厌氧或者兼性好氧. 粪大肠菌群:上叙总大肠菌群中一类在46度下仍然能够产3产7的.
大肠菌群检测方法通常采用培养法或PCR法。
1. 培养法:将样品接种于适当含有营养物质的培养基上,在恒温条件下培养一定时间(一般为24-48小时),观察是否有细菌生长。如果有,则说明样品中存在大肠杆菌等肠道细菌。该方法具有灵敏度高、准确性好的特点,但需要较长的培养时间和较高的成本。
2. PCR法:利用大肠杆菌等肠道细菌的特异性DNA序列设计引物,进行PCR扩增。通过检测PCR产物是否存在来确定样品中是否存在大肠杆菌等肠道细菌。该方法具有快速、高灵敏度和高特异性的优点,但需要注意引物设计和PCR条件的控制。
无论采用哪种方法,都需要在实验室条件下进行操作,并由专业人员进行分析和判断结果。同时,为了保证饮用水的安全卫生,建议选择正规的检测机构进行检测。
化妆品检测项目中粪大肠菌群的检测流程:
10g/mL样品+90mL灭菌生理盐水 →10mL+10mL双倍乳糖胆(含中和剂)培养基→粪大肠菌群 44.5℃,48h培养
注:在化妆品检测项目中,如果样品含有油脂性的成分,如精油,在样品前处理中需加入液体石蜡、吐温80、生理盐水进行均质,使样品能够均匀分散开来。
粪大肠菌群又是一个什么样的微生物呢?下面我们来详细介绍下:
大肠菌群:大肠菌群并非细菌学分类命名,而是卫生细菌领域的用语,它不代表某一个或某一属细菌,而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌,这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。
定义(GB2010):在一定培养条件下能发酵乳糖、产酸产气的需氧和兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。
粪大肠菌群:大肠菌群的一种,又称耐热大肠菌群,培养温度:44.5±0.5℃,粪大肠菌群是化妆品检测项目中必检的微生物项目。
大肠埃希氏菌:((Escherichia. coli )通常称为大肠杆菌。根据不同的生物学特性将致病性大肠杆菌分为5类:
致病性大肠杆菌(EPEC)、
肠产毒性大肠杆菌(ETEC)、
肠侵袭性大肠杆菌(EIEC)、
肠出血性大肠杆菌(EHEC)、
肠黏附性大肠杆菌(EAEC)。
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发酵管法检测大肠菌群,小倒管的放置很重要,一个不小心就会导致小倒管底部出现小气泡。避免方法如下:
①要确保小倒管内避洁净,特别是不能有油污。必要时可以用铬酸洗液彻底清洁
②首先用带针头的注射器,向小倒管内注满液体培养基,然后再放入盛装了培养基的试管里
③灭菌后,先仔细观察,剔除小倒管内有小气泡的培养管
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