流式细胞仪检测的原理？

一、流式细胞仪检测的原理？

流式细胞仪检测是利用细胞对激光的反射和散射以及荧光染料的发射来识别和分析细胞的一种技术方法。其原理是将单个细胞通过喷嘴形成单个细胞液滴，液滴在激光束的照射下，细胞内染料吸收激光光源能激发荧光反应，荧光信号经过光电转换器转化为电信号后被传回电子计算机进行信号处理，利用参数分析仪将各项参数初步加工处理，最终通过比较筛选出目标细胞种群。流式细胞仪检测作为一种高效、快速、准确的细胞分析方法，可以在短时间内对细胞进行定量和定性分析，广泛应用于医学、生物学、免疫学、遗传学等领域。

二、流式细胞仪FACSVerse可以检测什么抗体？

流式细胞仪FACSVerse可以检测（单克隆抗体）。仪器适用范围：流式细胞仪结合定量荧光细胞化学方法，单克隆抗体和免疫荧光染色原理和技术，对快速流动液体中的单细胞的多种参数进行细胞定性和定量分析以及细胞分选纯化。应用于细胞周期和DNA倍体分析、凋亡检测、细胞免疫表型分析、细胞因子的测定等方面。

三、如何用流式细胞仪检测GFP的表达？

一般流式细胞仪都有FITC通道,GFP可以用该通道来测量.用同一细胞系的转染了无GFP质粒的细胞做阴性对照,设置阈值.

四、用流式细胞仪检测各个象限的意义？

左上象限为坏死细胞，左下象限为正常细胞，右上象限为早期凋亡细胞，右下象限为晚期凋亡细胞。

五、流式细胞仪检测有个设门法.怎样设门？

所谓的门，在流式细胞仪检测的时候术语叫做gate。流式细胞仪是针对细胞（后者颗粒）的群来做研究的。往往是先选中感兴趣的一个细胞群，再分析下一步的染色，可以进行很多分级。

比如先从所有细胞中画出淋巴细胞，可以在FSC-SSC散点图上画出淋巴细胞的群，比如一个方框，或者任意曲线的gate，也就是所谓的门。把淋巴细胞括在内。然后在另外一个散点图上只显示这个gate里的细胞，但是把横坐标和纵坐标改为其他荧光标记。总之，门就是一个选择细胞群的手段。

六、凋亡流式细胞仪检测需要多少目的筛网筛细胞？

根据你细胞的大小和机器的要求了。目的是不会到时机器的管路堵塞就好。比如70微米之类的就好了。

上机后，要设置单细胞门来排除非单细胞的信号，建议使用SSC-W加SSC-H。

七、流式细胞仪在实验室主要用于哪些检测？

流式可以检测的样本很多：细胞表面的蛋白，通过荧光抗体直接标记细胞内部的蛋白，细胞固定，通透后再用荧光抗体识别细胞内部的DNA含量，细胞固定，通透后加DNA染料细胞内部钙离子浓度，直接加钙离子浓度荧光染料染色细胞内部线粒体膜电位，比如JC-1，罗丹明染料使用微球阵列，可以同时检测溶液中数十种可溶性蛋白的浓度

八、流式细胞仪原理？

流式细胞仪的工作原理是：将待测细胞经特异性荧光染料染色后放入样品管中，在气体的压力下进入充满鞘液的流动室。在鞘液的约束下细胞排成单列由流动室的喷嘴喷出，形成细胞柱。流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。这两种信号同时被前向光电二极管和90°方向的光电倍增管接收。光散射信号在前向小角度进行检测，这种信号基本上反映了细胞体积的大小；荧光信号的接受方向与激光束垂直，经过一系列双色性反射镜和带通滤光片的分离，形成多个不同波长的荧光信号。

这些荧光信号的强度代表了所测细胞膜表面抗原的强度或其核内物质的浓度，经光电倍增管接收后可转换为电信号，再通过模/数转换器，将连续的电信号转换为可被计算机识别的数字信号。计算机把所测量到的各种信号进行计算机处理，将分析结果显示在计算机屏幕上，也可以打印出来，还可以数据文件的形式存储在硬盘上以备日后的查询或进一步分析。

检测数据的显示视测量参数的不同由多种形式可供选择。单参数数据以直方图的形式表达，其X轴为测量强度，Y轴为细胞数目。一般来说，流式细胞仪坐标轴的分辨率有512或1024通道数，这视其模数转换器的分辨率而定。对于双参数或多参数数据，既可以单独显示每个参数的直方图，也可以选择二维的三点图、等高线图、灰度图或三维立体视图。

细胞的分选是通过分离含有单细胞的液滴而实现的。在流动室的喷口上配有一个超高频电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测定细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正负不同的电荷，当液滴流经带有几千伏特的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，不予充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。对分选出的细胞可以进行培养或其它处理，做更深的研究。

九、流式细胞仪fsc和ssc检测点与荧光通道相同吗？

不一样的，是两个分开的通道。 FSC的检测器位于激发激光的轴向位置，而SSC则位于90度角

十、怎样利用PI单染色法进行流式细胞仪检测细胞凋亡？

一、基本原理

流式细胞仪检测细胞凋亡：PI单染色法其原理主要是根据细胞凋亡时在细胞、亚细胞和分子水平上所发生的特征性改变。这些改变包括细胞核的改变、细胞器的改变、细胞膜成分的改变和细胞形态的改变等。

二、试剂与仪器

1、PBS溶液

2、PI染液：将PI溶于PBS（pH7.4）中，终浓度为100ug/ml。用棕色瓶4℃避光保存

3、70%乙醇

4、400目筛网

5、流式细胞仪

三、实验步骤

1、收集细胞{数目约（1~ 5）×106个/mL｝，500~ 1000 r/min离心5min，弃去培养液。

2、3ml PBS洗涤1次。

3、离心去PBS，加入冰预冷的70%的乙醇固定，4℃，1—2小时。

4、离心弃去固定液，3mlPBS重悬5min。

5、400目的筛网过滤1次，500—1000r/min离心5min，弃去PBS。

6、用1ml PI染液染色，4℃避光30min。

7、流式细胞仪检测：PI用氩离子激发荧光，激光光波波长为488nm，发射光波波长大于630nm，产生红色荧光分析PI荧光强度的直方图也可分析前散射光对侧散射光的散点图。

8、结果判断：在前散射光对侧散射光的散点图或地形图上，凋亡细胞与正常细胞相比，前散射光降低，而侧散射光可高可低，与细胞的类型有关;在分析PI荧光的直方图时，先用门技术排除成双或聚集的细胞以及发微弱荧光的细胞碎片，在PI荧光的直方图上，凋亡细胞在G1/G0期前出现一亚二倍体峰。如以G1/G0期所在位置的荧光强度为1.0，则一个典型的凋亡细胞样本其亚二倍体峰的荧光强度为0.45，可用鸡和鲑鱼的红细胞的PI荧光强度做参照标准，两者分别为0.35和0.7，可以确保在两者之间的不是细胞碎片而是完整的细胞。

四、注意事项

细胞凋亡时，其DNA可染性降低被认为是凋亡细胞的标志之一，但这种DNA可染性降低也可能是因为DNA含量的降低，或者是因为DNA结构的改变使其与染料结合的能力发生改变所致。在分析结果时应该注意。