1、共享引物PCR(Shared primer PCR):用3条引物来扩增两种不同的DNA序列,其中一条引物与两种DNA序列都互补,这条引物与另外两条引物分别组成两对PCR引物。又称引物竞争法PCR。
2、多重PCR:在一个反应体系中使用一对以上引物的PCR称为多重PCR。其结果是产生多个PCR产物,用于检测特定基因序列的存在或缺失。
3、不对称PCR(Asymmetric PCR)在PCR中加入的上、下游引物量不同,一般为100:1,在前10~15个循环中产物为双链,当低浓度引物消耗尽后,高浓度引物介导的PCR就会产生大量单链DNA。用于产生大量单链DNA可用于测序。
4、锚定PCR(Anchored PCR):以mRNA为模板,用oligo(dT)或与mRNA互补的寡核苷酸作引物,在cDNA3`端加上polydG作锚位,用poly(dc)作锚引物,进行PCR扩增。可用于仅知一端顺序,另一端未知,或多变的DNA扩增。
5、反向PCR:是用反向的互补引物来扩增两引物以外的DNA片段,对某个已知DNA片段两侧的未知序列进行扩增。可对未知序列扩增后进行分析,如探索邻接已知DNA片段的序列;用于仅知部分序列的全长cDNA的克隆,扩增基因文库的插入DNA;建立基因组步移文库。
6、彩色PCR(color PCR ):用不同的荧光物质标记PCR引物的5’端,扩增产物可发出不同的荧光。 7、原位PCR:原位聚合酶链式反应(In Still PCR,Is-PCR)是由Haase等于1990年首创。它是利用完整的细胞作为一个微小的反应体系来扩增细胞内的目的片段,在不破坏细胞的前提下,利用一些特定的检测手段来检测细胞内的扩增产物。
8、定量PCR(quantitative PCR):以外参或内参为标准,通过对PCR终产物的分析或PCR过程的监测,对PCR起始模板量的定量。基本原理:将目的基因和一个单拷贝的参照基因置同一试管 PCR 电泳得两条区带比较两区带的丰度或引物标上标记物检测放射性或荧光强度。 9、差异显示PCR(DD-PCR):是目前应用最多的开放的DGE技术, 它是1992 年Liang 和Pardee 在Welsh 等人建立的AP-PCR 方法基础上建立起来的。其基本原理是将细胞中的mRNA 逆转录为cDNA, 利用不同的锚定引物与随机引物组合,对cDNA 进行PCR 扩增、电泳显示差异基因,再经二次PCR 扩增后, 进行克隆及测序。与其他DGE 技术相比, DD-PCR 具有简单易行、灵敏度高、所需起始材料少及可以同时进行多样本间的比较等优点, 但也存在假阳性较高、重复性差及确证耗时费力等缺陷。
10、重组PCR(Recombinant PCR):PCR参与的体外基因突变过程称之为重组PCR。设计合成带突变的引物→PCR扩增。
首先进行标本采集,包括咽拭子、鼻拭子、痰液、支气管灌洗液、肺泡灌洗液、尿液、胸水等,送到专门机构进行核酸提取。
病毒RNA先需要转录为CDNA,再进行扩张检测,用指定的荧光定量PCR仪进行检测,标本的采集、保存、转运、核酸提取、转录、检测都有严格的要求。PCR检测临床主要用于感染性疾病、肿瘤、遗传疾病检测,明确诊断,针对性治疗。
1、RT-PCR: RT-PCR 原理:首先提起RNA,然后用逆转录酶与MRNA为模板进行CDNA第一链的合成,然后的原理和PCR就一样了! RT-PCR意义:RT-PCR是个半定量的试验,可以确定在MRNA水平的表达差异,即在转录水平 !
2、免疫PCR(immuno polymerase chain reaction , IPCR IPCR原理:是用一段已知DNA 分子标记抗体作为探针,用此探针与待测抗原反应,PCR 扩增粘附在抗原抗体复合物上的这段DNA 分子,电泳定性,根据特异性PCR 产物的有无,来判断待测抗原是否存在。
IPCR意义:免疫PCR 是迄今最敏感的一种抗原检测方法,理论上可以检测单个抗原分子,但实践中它的敏感性受许多因素的影响,如连接分子、显示系统的选择、DNA 报告分子的浓度、PCR 循环次数等。IPCR结合了酶联免疫分析的多功能性和PCR的扩增能力和灵敏性。
其结果,ELISA的最低的检测限度被扩大了100-10000倍。由于PCR 产物在抗原量未达到饱和前与抗原抗体复合物的量成正比,因此免疫PCR 还可用于抗原的半定量试验。
PCR技术以其自身巧妙的原理有与众不同的特点,高特异性、高敏感性及简便快捷使其成为基因诊断首选的技术之一。
一、高特异性,PCR扩增严格遵守碱基配对原则的半保留复制。半保留复制是世界上最严格的复制方式之一,其新合成的子链与模板形成完全互补的镜像结构,从而充分保证了复制的准确性。另外,由于碱基互补原则,只有当引物与目的基因完全互补时,反应体系中的引物才能与模板产生复性,引物的延伸才得以进行,因此引物与模板的互补是复制的最基本条件,这从另一方面规定了PCR反应的高特异性。在生物界中,某种基因总有它最保守的、最具特征性的基因区段,它是某些生物,或某些型、亚型等功能分型所特有的。若能正确地选择这一区域作为扩增的目的基因,便可以充分地保障PCR检测的高度特异性。
二、高敏感性,在PCR反应中模板DNA以指数级迅速增加,扩增反应前期进入以指数级迅速增加,扩增反应后期进入平台反应期,一般经过30个循环即1——2小时内可以将靶序列增加百万倍以上,可以将微量的目标物(fg DNA)检测出来。过去采用的一些微量检测法,如酶联免疫吸附实验(ELISA)和放射免疫分析(RIA)其灵敏度分别为ng级和pg级,而PCR可达fg级,理论上可以检出病原体的单拷贝基因的存在。
三、简便快捷,Taq酶的使用使PCR技术可以自动化完成,各种高效荧光定量PCR仪相续问世使PCR操作可以在基层单位的实验室中顺利完成。在PCR的实际应用中,许多技术得到改进,扩增反应体积减少,多种成分预先混合减少加样步骤,这些简化步骤大多不影响PCR的扩增效果。特别是本公司率先研制的单管单人份的PCR试剂,使操作者节省时间精力,而且又不易污染,充分满足了临床快速诊断的要求PCR技术对样品要求低,不必严格纯化模板DNA,几乎所有的临床样本都能用于PCR扩增,本公司设计的一步法提取模板使临床PCR检测更加简便易行。
PCR局限性,由于Taq酶缺乏3’端到5’端外切酶活性,因而不能纠正反应中发生的错误的核苷酸掺入,复制的新的DNA链中有一定程度的错配碱基,估计错配率为9000个核苷有一个错配,41000个核苷酸可能导致一次码移位。然而错配碱基有终止延伸倾向,这使错配的DNA片段不会进一步扩大。另外,PCR要求比较严格,容易出现实验污染或操作污染而出现假阳性结果。同时如果扩增仪温度不准确,反应液处理不好导致PCR抑制物进入反应
新冠病毒疫情的爆发使得PCR检测成为一项至关重要的工具,它可以准确地检测出病毒的存在。对于在新西兰接受PCR检测并被确诊为阳性的病例,一个常见的问题是:“我需要多久才能康复?”本文将详细探讨新西兰PCR检测阳性后康复所需的时间。
首先,值得注意的是,每个人的康复时间会有所不同。一些病例可能只需要几天,而另一些病例可能需要几周甚至更长的时间。这取决于许多因素,包括个体的免疫系统的强度、病毒的毒力和病人的整体健康状况。
根据世界卫生组织的指导意见,一般来说,对于无症状或轻度症状的病例,病毒通常会在开始出现症状后的7-10天内被清除。然而,对于那些症状较为严重的病例,病毒可能会在体内停留更长的时间。
当然,这只是一个大致的估计。每个患者的康复过程都是独特的,并且应该在医生的指导下进行监测和管理。医生将根据临床表现、症状改善情况以及PCR检测结果来决定病人是否康复。
在康复期间,患者需要遵守一些注意事项,以确保病毒彻底清除并减少传播的风险。
此外,康复期间的患者应该注意自己的身体状况,并及时就医。如果症状恶化或出现其他健康问题,应立即咨询医生。
即使在康复后,我们仍应保持警惕。以下是一些康复后的建议:
总体而言,新西兰PCR检测阳性后的康复时间因个体差异而异。该过程需要耐心、合理的自我隔离和注意事项,以确保病毒被彻底清除,并减少传播的风险。在康复期间,及时咨询医生并遵循其建议是非常重要的。
希望新西兰能够尽快战胜这一疫情,恢复正常的生活秩序。
新冠病毒(COVID-19)自从在全球爆发以来,已经席卷了许多国家和地区。为了控制疫情的传播,各国纷纷采取了多种防控措施。其中,PCR检测成为最常用的方法之一,以识别感染了新冠病毒的个体。本文将详细介绍PCR检测的原理以及其结果出来需要多长时间。
PCR(聚合酶链式反应)是一种使用体外扩增技术,能够快速复制和放大DNA样本的方法。在新冠疫情中,PCR检测主要用于检测患者体内是否存在新冠病毒的遗传物质,即病毒的RNA。
PCR检测的原理非常复杂,但基本上可以分为三个主要步骤:
许多人都关心PCR检测结果出来需要多久时间。实际上,检测结果的时间会受到多种因素的影响:
一般来说,PCR检测结果的出来时间大约为24到48小时。但需要注意的是,这只是一个大致的时间范围,在实际操作中可能会有所不同。有些实验室可能能够在更短的时间内提供结果,而有些实验室可能需要更长的时间。
如果你希望获得更快的PCR检测结果,有一些方法可以帮助你加快等待时间:
总之,PCR检测是当前新冠疫情中最常用的检测方法之一。通过PCR检测,我们可以快速准确地确定感染新冠病毒的个体。尽管PCR检测结果的出来时间可能有所不同,但一般情况下,我们可以在24到48小时内获得结果。如有需要,你也可以采取一些措施来加快检测结果的出来时间。
在这个全球范围内的新冠疫情肆虐时期,核酸检测成为了我们生活中的一部分。旅行、工作、学习等各种场合都要求进行新冠病毒检测。而在新西兰,PCR检测便是目前最为常见和可靠的检测方式。
PCR(Polymerase Chain Reaction)检测是一种常见的分子生物学技术,主要用于检测DNA或RNA的存在。在新冠疫情中,PCR检测被广泛应用于检测新冠病毒的存在与否。
PCR检测通过以下几个基本步骤进行:
PCR检测的过程经过多次循环,每次循环都会将DNA序列指数级增加。这种高灵敏度的检测方法可以在样本中检测到微量的病毒核酸。
PCR检测被广泛选择作为新冠病毒检测的首选方法,主要有以下几个原因:
因此,在新西兰,PCR检测成为了最受推崇和可信赖的新冠病毒检测方式。
许多人关心的问题是,新西兰PCR检测的价格是多少?实际上,检测价格因各种原因而有所变动,包括检测机构、地区、检测方法和服务等。
一般来说,在新西兰进行私人PCR检测的价格范围从300新西兰元到500新西兰元不等。这个价格包括样本采集、检测、结果解读等服务。具体的价格会根据不同的实验室和机构而有所差异。
此外,一些公共卫生部门提供免费的PCR检测服务。在新西兰,如果你有病毒相关症状或被确定为病毒暴露风险,你可以前往当地的测试站点免费进行PCR检测。这些测试站点通常由政府或相关部门运营。
如果你需要进行PCR检测,你可以通过以下方式进行预约:
请记住,在预约过程中,要提供准确的个人信息和相关证件,以便机构能够为你提供准确的服务。
PCR检测通常会在几个小时到几天内提供结果。实验室会将结果发送给你,或者你可以通过在线平台查看结果。
正常情况下,如果结果为阴性,表示没有检测到新冠病毒的存在。如果结果为阳性,表示检测到新冠病毒核酸,需要进一步确认和治疗。
如果你对结果的解读有任何疑问,建议咨询相关专业医生或疾病专家,以获取详细的解读和建议。
无论是出行、工作还是其他活动,新冠病毒检测已成为我们生活中的必要环节。在新西兰,PCR检测被广泛应用,并且价格在300到500新西兰元不等。
通过了解PCR检测的过程、优势以及预约和结果解读等方面的信息,我们可以更好地了解并合理利用这项重要的检测技术,保持自身和他人的健康与安全。
RNA病毒必须用RT-PCR,一般的PCR是以DNA为模板的,RNA病毒首先要看它是什么类型。如果逆转录病毒,则用RT-PCR检测,否则用PCR检测。
聚合酶链式反应(PCR)是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术,它可看作是生物体外的特殊DNA复制,PCR的最大特点是能将微量的DNA大幅增加。
RNA,即Ribonucleic Acid,存在于生物细胞以及部分病毒、类病毒中的遗传信息载体。RNA由核糖核苷酸经磷酸二酯键缩合而成长链状分子。一个核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和碱基构成。RNA的碱基主要有4种,即A(腺嘌呤)、G(鸟嘌呤)、C(胞嘧啶)、U(尿嘧啶),其中,U(尿嘧啶)取代了DNA中的T。核糖核酸在体内的作用主要是引导蛋白质的合成。
atk检测是核算的抗原检测。抗原检测的优点是能马上就能知道检测结果,但缺点是捕捉病毒存在的能力要比PCR检测低,与PCR检测相比,会漏掉很多真正的感染者,也就是说,是阴性的话,比PCR检测还要“怀疑是否真的没染上?”。
但是,对具有较多病毒量的发病后第9天以内(※2)的有症状者而言,其与PCR检测结果的一致率高,所以抗原检测的结果就直接被作为确诊来使用了(截止到2021年1月31日)。
此外,抗原检测分为“定量检查”和“定性检查”两种类型,定性检测是判定有无抗原,只要是试剂就可以检测,但是它的缺点是:可使用的被检体有限(唾液不可);不能用于无症状者;精度较低,而定量检测是测定抗原量,比定性检查精度高,但是需要有特殊的测量仪器。
PCR是抗体检测是核酸扩增技术的一种检测,提取HPV病毒的遗传物质(核酸),然后进行加速扩增,可以将正常情况的分裂周期加速,属于分子学检测范畴,敏感度和准确性都优于酶联免疫法(ELISA法),应该在目前是属于最准确先进的.
采用从胃活检粘膜组织细胞中提取hp的DNA,用pCr的方法对微量DNA的碱基序列,特异性地扩增测定HP菌数
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