elisa实验原理操作步骤？

一、elisa实验原理操作步骤？

　(二)　操作步骤

　　方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1.　包被：用0.05M PH9.�碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O・D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O・D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

二、ELISA的实验原理是什么？

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。

酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。

滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型,出现颜色反应。

因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。

此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定,这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来,使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

三、elisa实验分析公式？

mU=吸收值(10-3)=双孔吸收值的平均OD值-底物OD值，若样品的吸收值超过比色测定范围，应适当稀释后再检测。

四、elisa捕获法的原理？

elisa捕获法用于检测特异性的IgM。样品中针对某种抗原的特异性IgM和IgG常同时存在，IgG的存在将干扰IgM抗体的测定。

因此，测定IgM抗体需采用捕获法，先将样本中所有的IgM（特异性和非特异性IgM）捕获固定在固相上，去除IgG后，再测定特异性IgM。

五、elisa的原理和步骤？

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

操作步骤:

　1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。

2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟。

3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。

4．洗板5次。

5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。

　6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。

7．洗板5次。

8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。

9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

10．洗板5次。

11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。

12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。

13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。

六、elisa实验用什么质控方法？

1. Elisa实验常用的质控方法有内标法和外标法。2. 内标法是在每个样本中添加已知浓度的内标物，通过内标物的测量结果来评估实验的准确性和稳定性。外标法是在每个实验板中添加一系列已知浓度的标准品，通过标准品的测量结果来建立标准曲线，进而计算样本的浓度。3. 内标法可以减少实验误差和样本间的变异性，提高实验的准确性和可重复性。外标法可以通过标准曲线来精确计算样本的浓度，同时也可以评估实验的灵敏度和线性范围。4. 此外，还可以使用阳性对照和阴性对照来验证实验的可靠性和准确性，确保实验结果的可信度。5. 在Elisa实验中选择适合的质控方法，可以有效地评估实验的质量和结果的可靠性，提高实验的准确性和可重复性。

七、ELISA实验为什么加终止液？

终止液是一种阻止（生化试剂）化学反应继续进行的一种试剂，例如ELISA酶联免疫实验结果出来后由于显色剂和残留酶标液作用，反应还在继续进行中，会影响实验结果数值，就需要终止液的作用了

八、ELISA法显色原理是啥？

正相反。

一般酶和抗体是化学键连接的。阳性对照中，抗体和抗原结合导致抗体的固定化（也就是说结合到板子上了），与抗体连接的酶就一并固定化了，所以再往酶标板中加入底物，酶就发挥作用显色了。阴性对照中，抗原没有，所以抗体不能固定化，随之没有酶的固定化，所以加入底物不显色。

九、elisa法基本原理？

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

进行检测时，样品中的受检物质（抗原或抗体）与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析。

十、elisa洗涤液选择原理？

ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。ELISA实验洗涤重点之洗涤液的选择：

1.某一项目的洗液建议使用该试剂盒内的洗液；

2.同一ELISA试剂盒洗液用完了，建议采用同一批号的洗液；

3.同一批号的洗液也用完了，建议采用同一项目的试剂洗液；

4.同一项目的洗液用完了，建议使用该项目其他厂家的洗液；

5.同一项目所有厂家都用完了，建议采用同一系列项目的洗液(比如甲乙丙丁戊庚肝抗体检测，属于肝炎系列，急用时可以暂时混用)；

6.不建议国产洗液与进口洗液混用，也更不建议不同系列项目的洗液混用，这两点都是因为洗液的配置成分不同，特别是不同项目的洗液(正规试剂厂家)，主要组分都不太一样。

注意：虽然对强阳性标本影响不是很大，但对于临界阳性阴性(灰区)标本影响较大，所以不提倡不同系列项目洗液混用。