植物DNA提取原理？

一、植物DNA提取原理？

植物DNA的提取

1、目的要求

学习从新鲜的叶片中提取植物总DNA的方法。

2、实验原理

本实验介绍的就是一种快速简便提取植物总DNA的方法：先将新鲜的叶片在液氨中研磨，以机械力破碎细胞壁，然后加入十六烷三甲基溴化铵（简称CBA,是一种阳离子去污剂)分离缓冲液，使细胞膜破裂，同时将核酸与植物多糖等杂质分开。再经氯仿-异戊醇提取去除蛋白，即可得到适合于酶切的DNA。

3、试剂和器材

一、试剂

CTBA抽提缓冲液：2%CTBA.100mmolL Tris-HCl,pH8.0;20mmolL EDTA;1.4molL

NaCl;0.2%(vv)巯基乙醇共100mL:称取2 g CTBA,8.18 g NaCI,0.74 g EDTA Na22H20,加入10mL1molL的Tris-HCl,pH8.0,0.2mL的巯基乙醇，加水定容至100mL.

TE:TrisEDTA缓冲液：10mmolL Tris-HCl,pH8.0;1mmolL EDTA。

异丙醇：乙醇：氯仿一异戊醇(24：1，V:V):液氮。

二、材料

新鲜植物叶片。

三、材

研钵：离心机：恒温水浴。

4、操作方法

1.称取lg新鲜叶片，置于预冷的研钵中，倒入液氮，将叶片研至粉末。

2.将叶片粉末转入一个30mL离心管中。

3。加10 mL CTBA抽提缓冲液，轻轻转动离心管使之混匀。于65℃温育10min。加入等体积的氯仿一异戊醇，轻轻颠倒混匀。

4.室温下4000rmin离心10min,回收上层水相。在回收的上层水相中。

5。加入23体积预冷的异丙醇（预冷至一20℃），轻轻混匀，置冰箱中放置数小时梦至过夜，使核酸沉淀下来。

6.室温下4000rmin离心10min。

7.小心倒去上清液，用80%乙醇洗涤沉淀物.尽量沥干乙醇，置于真空干燥器内干称重，计算产率。

8.将DNA沉淀溶于1mLTE中。

二、DNA提取原理与方法？

提染色体dna的基本原理：

基因工程实验所需要的基因组DNA 通常要求分子量尽可能大，以此增加外源基因获得率，但要获得大片段的DNA 非易事，细菌基因组DNA通常是个很大的环状态DNA，而在抽提过程中，不可避免的机械剪切力必将切断DNA，如果要抽提到大的DNA 分子，就要尽可能地温和操作，减少剪切力，减少切断DNA 分子的可能性；分子热运动也会减少所抽提到的DNA分子量，所以提取过程也要尽可能在低温下进行。另外细胞内及抽提器皿中污染的核酸酶也会降解制备过程中的DNA，所以制备过程要抑制其核酸酶的活性。

三、盐析法提取DNA原理？

1. 将待提取DNA的细胞或组织放入离心管中，加入表面积约为细胞或组织重量1/10的冰冷高盐缓冲液，注意不要过分割开组织。

2. 均匀混合后，将离心管放置于高速离心机中，高速离心使细胞或组织破裂，释放出DNA分子。经过离心分离后，DNA分子被留在上清液中，细胞或组织残渣则留在沉淀中。

3. 加入等体积冷异丙醇，引发DNA分子的沉淀。这个过程中，异丙醇的高浓度会使DNA不稳定性增加，不溶于水而沉淀出来。由于DNA分子比其他细胞成分更大、更重，因而更容易沉淀。

4. 轻轻倒掉上清液，用70％的乙醇重悬沉淀物，让DNA重新溶于水。

5. 最终，可以在纯净水中溶解DNA，以便进一步分析和操作。

四、dna粗提取的原理？

DNA粗提取的原理是利用DNA和RNA、蛋白质和脂质等在物理和化学性质方面的差异，分离出DNA。DNA是一种重要的遗传物质，在细胞中含量丰富，但它在细胞中的分布不均，所以需要从细胞中提取出来，以便进行相关实验。

在DNA粗提取过程中，需要选择适当的材料，并进行预处理，以保证后续提取过程的顺利进行。常用的材料包括动物细胞、植物细胞、细菌、病毒等。

在提取过程中，需要利用洗涤剂、酸碱剂、醇类溶剂等化学试剂来破坏细胞壁和细胞膜，去除蛋白质和脂质等杂质，最终得到含有DNA的溶液。

常用的提取方法包括酚氯仿提取法、离子交换柱提取法、硅胶柱提取法等。这些方法可以根据实验需求进行选择和调整，以达到最佳的提取效果。

五、煮沸法提取dna原理？

利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

六、离心柱法提取dna原理？

实验原理1. 离心柱结构：特殊硅基质吸附材料，特异性吸附DNA，而RNA与蛋白质穿过。

在正常情况下，核酸表面覆盖了一层由水分子组成的亲水薄膜，以维持其水溶性。高浓度盐离子的加入破坏了核酸表面亲水薄膜的相对有序排列，形成了疏水环境。在此环境中，核酸与硅胶膜能有效结合，而蛋白质、代谢产物和其他污染物则不能结合。

2. 碱变性抽提的原理是在pH高于12.6的碱性条件下，染色体DNA的氢键断裂，破坏了碱基配对，导致双螺旋结构解开而变性，但闭环的质粒DNA链由于处于拓扑缠绕状态而不能彼此分开。当pH调至中性时，质粒DNA链迅速恢复到原来构型，仍保存于溶液中。而变性的染色体DNA不能再复性，通过离心，随不稳定的大分子RNA、蛋白质-SDS复合物等一起沉淀下来，使两者得以分离

七、DNA提取的步骤及原理？

DNA的提取方法

一.酚抽提法：先用蛋酶K、SDS破碎细胞，消化蛋白，然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

二.甲酰胺解聚法：破碎细胞同上，然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合，再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒缠绕法：用盐酸胍裂解细胞，将裂解物铺于乙醇上，然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅，DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

四.异丙醇沉淀法：基本同1法，仅用二倍容积异丙醇替代乙醇，可去除小分子RNA（在异丙醇中可溶状态）

五.表面活性剂快速制备法：用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞，然后用蛋白酶K或酚去除蛋白，乙醇沉淀或透析。

六.加热法快速制备：加热96℃-100℃，五分钟，然后离心后取上清，可用于PCR反应。

七.碱变性快速制备：先用NaOH作用20分钟，再加HCI中和，离心后取上清，含少量DNA。

八、ctab法提取植物dna的原理？

ctab法提取植物DNA的原理

冷冻的植物组织，在低温干燥状态下机械磨碎。通常精提DNA，都要加液氮使材料变脆，易于研磨。低温降低了DNase的活性，利用CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）去污剂溶解细胞膜，使核蛋白等解聚，使DNA游离出来。

九、煮沸法提取dna的原理？

利用核酸溶解于水的性质,将组织细胞破碎后,用低盐溶液除去RNA，然后将沉淀溶于水中，使DNA充分溶解于水中,离心后收集上清液.在上清中加入固体氯化钠调节至2.6M.加入2倍体积95%乙醇,立即用搅拌法搅出.然后分别用66% ٠80%和95%乙醇以及丙铜洗涤,最后在空气中干燥,既得DNA样品.此法提取的DNA中蛋白质含量较高,故一般不用.为除蛋白可将此法加以改良,在提取过程中加入SDS.

十、CTAB法提取DNA的原理和步骤？

1 CTAB法是利用阳离子表面活性剂CTAB溶解细胞壁和细胞膜，再通过酚/氯仿提取纯化DNA的一种常用方法。2CTAB溶解细胞壁的原理是CTAB通过与细胞壁中的负电离子沟通，改变细胞壁的电荷性质并使其断裂。CTAB溶解细胞膜的原理是使用CTAB和蛋白酶K分别破坏细胞膜和细胞内脂质。酚/氯仿纯化的原理是DNA在酚和氯仿两相溶液中的分配性不同，从而实现DNA的纯化。3CTAB法提取DNA的步骤包括：细胞裂解、蛋白酶K消化、有机物提取、乙醇沉淀和重悬。其中，通过逐步加入各种试剂使得DNA从细胞中不断脱落，最终得到纯化的DNA。