免疫共沉淀原理及步骤？

一、免疫共沉淀原理及步骤？

免疫共沉淀是一种可利用抗体结合目标蛋白质并从混合物中分离出来的技术。免疫共沉淀的原理是利用特异性抗体与目标蛋白质结合的亲和力，在特定条件下形成沉淀复合物。一般而言，正常的细胞或组织中存在着多种类型的蛋白质，其中有一些不易被检测出。通过免疫共沉淀技术可以将目标蛋白与其结合物同时分离出来，以便其定量或进一步鉴定。

该方法主要步骤包括：

1. 制备细胞或组织的总蛋白质提取物。将含目标蛋白的标本组织或细胞样品进行离心去除细胞渣，然后将其裂解成细胞或组织总蛋白提取物。

2. 抗体与固相载体的结合。将特异性抗体与固相载体结合，形成抗体固定柱，使抗体可以捕获目标蛋白。

3. 样品孵育。将前文制得的提取物与抗体固定柱混合，使其进行孵育，在此过程中，目标蛋白与相应的抗体固相结合，同时被捕获在柱子上。

4. 沉淀复合物的洗涤。用高盐等条件缓冲液进行保洁涤洗，可去除染料和非特异性蛋白等污染物，以增加复合物的特异性和纯度。

5. 沉淀复合物的洗涤。用洗涤缓冲液洗涤免疫沉淀物质，使其更好的沉淀，去除杂质。

6. 沉淀复合物的回收。取下免疫沉淀液极其复合物质，可以进行后续的进一步分析，可用于Western blot、质谱分析、免疫组织化学等分析方法。

二、染色质免疫共沉淀的原理？

检测目标基因活性在保持组蛋白和DNA联合的同时，染色质被切成很小的片断，通过运用对应于一个特定组蛋白标记的生物抗体，将目标片段（组蛋白发生特异标记的片段）沉淀下来。

IP 是利用抗原蛋白质和抗体的特异性结合以及细菌蛋白质的“protein A”特异性地结合到免疫球蛋白的FC片段的现象活用开发出来的方法（免疫磁珠结合proteinA，proteinA结合抗体Fc段，抗体结合抗原即发生特异标记的组蛋白，这里要注意组蛋白是和DNA结合的，这样就把目标组蛋白和DNA的符合物沉淀下来了）。

在将组蛋白与DNA分离，用获得的DNA去做western blot ，从而检测那些基因的组蛋白发生了修饰。

检测已知蛋白的靶基因在生理状态下把细胞内的蛋白质和DNA交联在一起，超声波将其打碎为一定长度范围内的染色质小片段，然后通过所要研究的目的蛋白质特异性抗体沉淀此复合体，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而明确蛋白与哪些基因相互作用。

目前多用精制的protein A预先结合固化在argarose的beads上，使之与含有抗原的溶液及抗体反应后，beads上的prorein A就能吸附抗原达到精制的目的。实验最需要注意点就是抗体的性质。抗体不同和抗原结合能力也不同，免染能结合未必能用在IP反应。建议仔细检查抗体的说明书。特别是多抗的特异性是问题。

其次，要注意溶解抗原的缓冲液的性质。多数的抗原是细胞构成的蛋白，特别是骨架蛋白，缓冲液必须要使其溶解。为此，必须使用含有强界面活性剂的缓冲液，尽管它有可能影响一部分抗原抗体的结合。

另一面，如用弱界面活性剂溶解细胞，就不能充分溶解细胞蛋白。即便溶解也产生与其它的蛋白结合的结果，抗原决定族被封闭，影响与抗体的结合，即使IP成功，也是很多蛋白与抗体共沉的悲惨结果。

再次，为防止蛋白的分解，修饰，溶解抗原的缓冲液必须加蛋白每抑制剂，低温下进行实验。

每次实验之前，首先考虑抗体/缓冲液的比例。抗体过少就不能检出抗原，过多则就不能沉降在beads上，残存在上清。缓冲剂太少则不能溶解抗原，过多则抗原被稀释。

三、共沉淀的原理是什么？

共沉淀，一种沉淀从溶液中析出时，引起某些可溶性物质一起沉淀的现象。

产生共沉淀的原因有：

①表面吸附，由于沉淀表面的离子电荷未达到平衡，它们的残余电荷吸引了溶液中带相反电荷的离子。这种吸附是有选择性的：首先，吸附晶格离子；其次，凡与晶格离子生成的盐类溶解度越小的离子，就越容易被吸附；离子的价数愈高、浓度愈大，则愈容易被吸附。吸附是一放热过程，因此，溶液温度升高，可减少吸附。

②包藏，在沉淀过程中，如果沉淀剂较浓又加入过快，则沉淀颗粒表面吸附的杂质离子来不及被主沉淀的晶格离子取代，就被后来沉积上来的离子所覆盖，于是杂质离子就有可能陷入沉淀的内部，这种现象称为包藏，又叫吸留。由包藏引起的共沉淀也遵循表面吸附规律。例如，在过量氯化钡存在下沉淀硫酸钡时,沉淀表面首先吸附构晶离子Ba2+；为了保持电中性，表面上的Ba2+又吸引Cl-；如果晶体成长很慢，溶液中的硫酸钡将置换出大部分Cl-；如果晶体成长很快,则硫酸钡来不及交换Cl-, 就引起较大量的氯化钡的包藏共沉淀。因为硝酸钡比氯化钡的溶解度小，所以钡的硝酸盐比氯化物更易被包藏。

③生成混晶，如果晶形沉淀晶格中的阴、阳离子被具有相同电荷的、离子半径相近的其他离子所取代，就形成混晶。例如,当大量Ba2+和痕量Ra2+共存时，硫酸钡就可和硫酸镭形成混晶同时析出，这是由于二者有相同的晶格结构,Ra2+和Ba2+的离子大小相近的缘故。

四、免疫反应原理？

原理基本上是因为免疫系统识别出外来组织或细胞的表面抗原，引发了免疫反应。免疫系统通过识别外来抗原因而能够识别出身体内部的病原体和异物，但同时也会将异体组织或细胞视为外来抗原而进行攻击。

当异体组织或细胞被攻击时，免疫系统会分泌抗体或细胞毒素，破坏异体组织或细胞的结构和功能。

五、免疫排斥反应原理？

原理基本上是因为免疫系统识别出外来组织或细胞的表面抗原，引发了免疫反应。免疫系统通过识别外来抗原因而能够识别出身体内部的病原体和异物，但同时也会将异体组织或细胞视为外来抗原而进行攻击。当异体组织或细胞被攻击时，免疫系统会分泌抗体或细胞毒素，破坏异体组织或细胞的结构和功能。

在接受移植手术等场合，由于人体免疫系统会将异体组织或细胞视为外来抗原而进行攻击，因此需要进行免疫抑制治疗，抑制免疫反应，降低免疫排斥的风险。

六、什么共沉淀？

共沉淀(coprecipitation)，一种沉淀从溶液中析出时，引起某些共存的可溶性物质一起沉淀的现象。共沉淀是重量分析法误差的主要来源之一，主要原因有表面吸附，混晶，包埋等。共沉淀分离法是富集痕量组分的有效方法之一，是利用溶液中主沉淀物（称为载体）析出时将共存的某些微量组分载带下来而得到分离的方法。

七、免疫印迹的原理？

免疫印迹法原理：将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。

免疫印迹法 (Western blotting) 是一种将高分辨率凝胶电泳和免疫化学分析技术相结合的杂交技术。免疫印迹法具有分析容量大、敏感度高、特异性强等优点，是检测蛋白质特性、表达与分布的一种最常用的方法，如组织抗原的定性定量检测、多肽分子的质量测定及病毒的抗体或抗原检测等。 免疫印迹法(immunoblotting test,IBT)亦称酶联免疫电转移印斑法(enzyme linked immunoelectrotransfer blot,EITB),因与Southern早先建立的检测核酸的印迹方法 Southern blot 相类似，亦被称为Western-blot.

八、流式荧光免疫技术原理？

将荧光标记后的单细胞（或颗粒）悬液进入吸样管，进而随鞘液进入流动室。

进入流动室之前的管道变细，迫使鞘液从四周、样本在中心进入流动室，在外加压力的作用下由下向上（或由上向下）直线流动。

鞘液充满流动室将样品裹挟，当二者通过流动室喷嘴流出时，压力迫使鞘液包裹的液滴包含单一细胞或颗粒垂直通过检测区。

九、什么是共沉淀？

共沉淀(coprecipitation)，一种沉淀从溶液中析出时，引起某些共存的可溶性物质一起沉淀的现象。共沉淀是重量分析法误差的主要来源之一，主要原因有表面吸附，混晶，包埋等。

在沉淀晶格内部，正负离子按照一定的顺序排列，离子都被异电荷离子所饱和，处于静电平衡状态。而处于沉淀表面，棱角的离子电荷未达到平衡，它们的残余电荷吸引了溶液中带相反电荷的离子。沉淀颗粒越小，表面积越大，吸附溶液里异电荷离子的能力就越强。

十、共沉淀法制备三元前驱体原理？

共沉淀法制备三元前驱体是将镍盐、钴盐、锰盐配置成可溶性的混合溶液，然后与氨，碱混合，通过控制反应条件形成类球形氢氧化物。