考马斯亮蓝染色洗脱液是是用溶剂洗脱考纳斯亮蓝的溶液,配方如下:
考马斯亮蓝脱色液:1L
乙醇: 50ml
冰乙酸: 100ml
蒸馏水: 850m
Westernblot膜染色不推荐用考马斯亮蓝染色,背景太深,可以用丽春红或银染。如果要染30秒到1分钟左右即可,马上脱色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中,使用的水最低要求是蒸馏水,更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制,标准曲线的制作都要用到水。
如果不是使用蒸馏水,可能水里面会有一些游离的离子或者电解质,会影响试剂配制的准确性,干扰实验结果。
而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝发生变色反应,这样制作的标准曲线会比实际值偏高,导致最终浓度检测的结果比实际结果偏低。
考马斯亮蓝(coomassie brilliant blue)一定范围内与蛋白质浓度成正比,因此可用于蛋白质的定量测定。
考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速,常用来作为蛋白质含量的测定。
考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢,但是可以被洗脱下去,所以可以用来对电泳条带染色。
有毒。
考马斯亮蓝属于三苯甲烷类染料,可与蛋白质形成较强的非共价复合体.考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色;考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。
考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在465nm;当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收.其光吸收值与蛋白质含量成正比。
考马斯亮蓝G-250的配制:
1.称取100 mg考马斯亮蓝G-250,溶于50 mL 90%乙醇中,
2.加入85%的磷酸100 mL,
3.最后用蒸馏水定容到1 000 mL。 此溶液在常温下可放置一个月。
考马斯亮蓝显色法测定植物蛋白质含量,显色反应灵敏,最大吸收波长是595nm,而考马斯亮蓝的最大吸收波长是488nm,不干扰测定结果。
考马斯亮蓝脱色液是用于蛋白凝胶考马斯亮蓝染色后脱色的溶液。脱色1小时可以观察到蛋白条带;为观察到最清晰的蛋白条带则需脱色更长时间
0.25% 考马斯亮蓝R-250 :100ml
甲醇: 45ml
蒸馏水: 45ml
冰乙酸: 10ml
考马斯: 0.25g
考马斯亮蓝脱色液:1L
乙醇: 50ml
冰乙酸: 100ml
蒸馏水: 850m
0.25% 考马斯亮蓝R-250 :100ml
甲醇: 45ml
蒸馏水: 45ml
冰乙酸: 10ml
考马斯: 0.25g
考马斯亮蓝脱色液:1L
乙醇: 50ml
冰乙酸: 100ml
蒸馏水: 850m
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