考马斯亮蓝法测蛋白质含量用到哪些仪器？

一、考马斯亮蓝法测蛋白质含量用到哪些仪器？

蛋白质的存在影响酸碱滴定中所用某些指示剂的颜色变化，从而改变这些染料的光吸收。

在些基础上发展了蛋白质染色测定方法。涉及的指示剂有甲基橙、考马斯亮蓝、溴甲酚绿和溴甲酚紫。目前广泛使用的染料是考马斯亮蓝。考马斯亮蓝G-250在酸性溶液中为棕红色，当它与蛋白质通过范德华键结合后，变为蓝色，且在蛋白质一定浓度范围内符合比尔定律，可在595nm处比色测定。2—5分钟即呈最大光吸收，至少稳定1小时。在0.01—1.0 mg蛋白质/ml范围内均可。该法操作简便迅速，消耗样品量少，但不同蛋白质之间差异大，且标准曲线线性差。高浓度的Tris、EDTA、尿素、甘油、蔗糖、丙酮、硫酸铵和去污剂时测定有干扰。缓冲液浓度过高时，改变测定液pH值会影响显色。考马斯亮蓝染色能力强，比色杯不洗干净会影响光吸收值，不可用石英怀测定

二、考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法有什么优点？

　　考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法的优点是：　　

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；　　

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。　　

3.该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。　　考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

三、什么是考马斯亮蓝法（Bradford法）？

bradford法测定蛋白质含量的原理是考马斯亮蓝G250与蛋白质结合可以显色，用分光光度计在吸光度595nm处读数，通过标准蛋白与G250结合显色建立标准曲线，再加待测蛋白与G250结合显色后读数代入标准曲线测定蛋白质含量。不利因素主要是特殊蛋白的结构，缓冲液组分中有干扰试剂等。

四、考马斯亮蓝g-250法测定蛋白质含量的优势？

考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法的优点是：

1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；

2.其结合物在室温下1h内保持稳定。

3.该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,000μg/mL，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。 考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

五、考马斯亮蓝法与蛋白反应条件？

在酸性的反应条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。

所以考马斯亮蓝法测定蛋白质的条件是在酸性条件下。

六、考马斯亮蓝反应现象？

考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水最低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。

如果不是使用蒸馏水，可能水里面会有一些游离的离子或者电解质，会影响试剂配制的准确性，干扰实验结果。

而水中残留的有机物等可能会和考马斯亮蓝发生变色反应，这样制作的标准曲线会比实际值偏高，导致最终浓度检测的结果比实际结果偏低。

七、考马斯亮蓝的应用？

考马斯亮蓝（coomassie brilliant blue）一定范围内与蛋白质浓度成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。

考马斯亮蓝有G-250和R-250两种。其中考马斯亮蓝G-250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。

考马斯亮蓝R-250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。

八、考马斯亮蓝有毒吗？

有毒。

考马斯亮蓝属于三苯甲烷类染料,可与蛋白质形成较强的非共价复合体.考马斯亮蓝R250多用于聚丙烯酰胺凝胶电泳后蛋白质条带的染色；考马斯亮蓝G250是布拉德福德(Bradford)蛋白质定量试剂的主要成分。

考马斯亮蓝G-250在游离状态下呈红色,最大光吸收在465nm；当它与蛋白质结合后变为青色,蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收.其光吸收值与蛋白质含量成正比。

九、考马斯亮蓝法测定特点？

考马斯亮蓝显色法测定植物蛋白质含量，显色反应灵敏，最大吸收波长是595nm，而考马斯亮蓝的最大吸收波长是488nm，不干扰测定结果。

十、考马斯亮蓝脱色的标准？

考马斯亮蓝脱色液是用于蛋白凝胶考马斯亮蓝染色后脱色的溶液。脱色1小时可以观察到蛋白条带；为观察到最清晰的蛋白条带则需脱色更长时间