pcr及电泳的基本原理？

一、pcr及电泳的基本原理？

PCR及电泳技术的基本原理类似于DNA的 天然复制过程,其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成:①模板DNA的变性:模板DNA经加 热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;②模板DNA与引 物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;③引物的延伸:DNA模板--引物结合 物在TaqDNA聚合酶的作用下,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA 链互补的半保留复制链重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。

二、电泳涂装的基本原理？

阴极电泳涂料所含的树脂带有碱性基团，经酸中和后成盐而溶于水。

通直流电后，酸根负离子向阳极移动，树脂离子及其包裹的颜料粒子带正电荷向阴极移动，并沉积在阴极上，这就是电泳涂装的基本原理（俗称镀漆）。电泳涂装是一个很复杂的电化学反应，一般认为至少有电泳、电沉积、电解、电渗这四种作用同时发生

三、关于电泳设备的基本原理？

电泳槽（主槽）存装电泳槽液，被涂物在其中进行电泳涂装。由确保目标膜厚来决定槽容量，电泳涂装的其他一切装置都为本槽服务。　　确保涂膜的生成〈泳透力、膜厚分布等〉分为主槽和辅槽,槽液由出槽部溢流到辅槽。槽液循环搅拌系统用设置在槽底部槽液循环喷管将槽液吹出，进行槽内搅拌保持槽内涂料均一，防止颜料的沉淀冷却发热的涂装面，除去扩散的电解气泡，由循环泵、槽内配管、吹出喷嘴等组成槽内配管。喷嘴使用塑料制品，槽外配管使用不锈钢材，以防止电蚀。过滤装置粗过滤器：滤掉落入槽内的异物，保护循环泵。精密过滤器：除掉槽液中的尘埃、颗粒，降低车身表而的涂膜尘埃、颗粒弊病。多用金属纲状类型，多用纤维制的、透过面积大的筒状卷式或袋式。热交换器交换掉电涂装电能和泵工作的机械能转换成的热量，确保槽液温度稳定〈28 ±1)℃。作为阴极电泳的阳极，热交换器装在槽液循环管路中，采用不锈钢制板式换热器。一般用7~10℃水冷却；加热用40~45℃的温水。电极和极液循环系统除去电泳产生的剩余中和酸（HAc），保持中和浓度稳定，达到电泳涂装和维持槽内酸浓度的目的。电极有隔膜电极和裸电极两种，电极用耐酸不锈钢（SUS316等）。直流电泳电源产生直流的整流器供电泳涂装电流。阴极电泳场合车身作为（-1）极，通过绝缘的汇流排和挂架侧的导线通电在连续式生产场合，需大容量的电源。备用槽（置换槽）供定期清扫和维修时空出电泳槽，临时保管槽液用，为防止槽液沉淀和劣化,也需循环搅拌。电泳涂装室保护电泳槽，防触电，防溶剂蒸气扩散，设有排风换气系统。电泳清洗设备除去附着在车体上的浮漆，回收涂料，提髙涂膜外观质量，采用UF液喷洗和浸洗，逆工序回入主槽。电泳漆超滤回收装置提供电泳后清洗液，回收涂料除去槽液内的杂质离子，降低槽液电导，采用ED-RO装置净化UF液替代纯水，实现全封闭情况。

四、水电泳技术的基本原理？

水电泳技术基本原理是在电场中，带电颗粒向阴极或阳极迁移，迁移的方向取决于它们带电的符号，在被涂工件表面，阳离子树脂与阴极表面碱性作用，中和而析出不沉积物，沉积于被涂工件上。

涂料固体与工件表面上的涂膜为半透明性的，具有多数毛细孔，水被从阴极涂膜中排渗出来，在电场作用下，引起涂膜脱水，而涂膜则吸附于工件表面，而完成整个电泳过程。

五、电泳技术的基本原理是什么呢？电泳技术的基本？

电泳技术，是指在电场作用下，带电颗粒在由于所带的电荷不同以及分子大小差异而有不同的迁移行为从而彼此分离开来的一种实验技术。

许多生物分子都带有电荷，其电荷的多少取决于分子结构及所在介质的pH值和组成。由于混合物中各种组分所带电荷性质、电荷数量以及相对分子质量的不同，在同一电场的作用下，各组分泳动的方向和速率也各异。因此，在一定时间内各组分移动的距离也不同，从而达到分离鉴定各组分的目的。

电泳技术主要用于分离各种有机物（如氨基酸、多肽、蛋白质、脂类、核苷酸、核酸等）和无机盐；也可用于分析某种物质纯度，还可用于分子量的测定。电泳技术与其他分离技术（如层析法）结合，可用于蛋白质结构的分析，“指纹法”就是电泳法与层析法的结合产物。用免疫原理测试电泳结果，提高了对蛋白质的鉴别能力。电泳与酶学技术结合发现了同工酶，对于酶的催化和调节功能有了深入的了解。所以电泳技术是医学科学中的重要研究技术。

纸电泳和醋酸纤维薄膜电泳

纸电泳用于血清蛋白质分离已有相当长的历史，在实验室和临床检验中都曾经广泛应用。自从1957年Kohn首先将醋酸纤维薄膜用作电泳支持物以来，纸电泳已被醋酸纤维薄膜电泳所取代。因为后者具有比纸电泳电渗小、分离速率快、分离清晰、血清用量少以及操作简单等优点。

琼脂糖凝胶电泳

琼脂经处理去除其中的果胶成分即为琼脂糖。由于琼脂糖中硫酸根含量较琼脂为少，电渗影响减弱，因而使分离效果显著提高。例如血清脂蛋白用琼脂凝胶电泳只能分出两条区带（α-脂蛋白、β-脂蛋白），而琼脂糖凝胶电泳可将血清脂蛋白分出三条区带（α-脂蛋白、前β-脂蛋白和β-脂蛋白）。所以琼脂糖为较理想的凝胶电泳的一种材料。

血清中的脂类物质与载脂蛋白结合成水溶性的脂蛋白形式存在，各种脂蛋白中所含的载脂蛋白种类和数量不同、脂蛋白颗粒大小不同等因素，使它们在电场中的移动速率各异，因而可以通过电泳达到分离。

聚丙烯酰胺凝胶电泳

聚丙烯酰胺凝胶是一种人工合成的凝胶，具有机械强度好、弹性大、透明、化学稳定性高、无电渗作用、设备简单、样品量小（1~100ug）、分辨率高等优点，并可通过控制单体浓度或单体与交联剂的比例，聚合成不同孔径大小的凝胶，可用于蛋白质、核酸等分子大小不同的物质的分离、定性和定量分析。还可结合解离剂十二烷基硫酸钠（SDS），以测定蛋白质亚基的相对分子质量

电泳原理：

电泳是电泳涂料在阴阳两极，施加于电压作用下，带电荷之涂料离子移动到阴极，

并与阴极表面所产生之碱性作用形成不溶解物，沉积于工件表面。

它包括四个过程：

1 ）电解（分解）

在阴极反应最初为电解反应，生成氢气及氢氧根离子 OH ，此反应造成阴极面形成

一高碱性边界层，当阳离子与氢氧根作用成为不溶于水的物质，涂膜沉积，方程式

为： H2O→OH+H

2 ）电泳动（泳动、迁移）

阳离子树脂及 H+ 在电场作用下，向阴极移动，而阴离子向阳极移动过程。

3 ）电沉积（析出）

在被涂工件表面，阳离子树脂与阴极表面碱性作用，中和而析出不沉积物，沉

积于被涂工件上。

4 ）电渗（脱水）

涂料固体与工件表面上的涂膜为半透明性的，具有多数毛细孔，水被从阴极涂

膜中排渗出来，在电场作用下，引起涂膜脱水，而涂膜则吸附于工件表面，而

完成整个电泳过程。

?? 电泳表面处理工艺的特点：

电泳漆膜具有涂层丰满、均匀、平整、光滑的优点，电泳漆膜的硬度、附着力、

耐腐、冲击性能、渗透性能明显优于其它涂装工艺。

六、电泳技术基本原理及详解？

电泳技术是一种将带电粒子或分子在电场作用下运动的方法，利用溶液中的电解质和电场的作用，将带电的粒子或分子移动到电场的相反极性处的技术。其基本原理如下：

电场作用：在电泳槽中施加直流电场，正负电极之间形成电场。电场中的带电粒子或分子会受到电场力的作用，向电场相反极性的方向运动。

电解质：电泳液中的电解质起到两个作用：一是提供离子，形成电流，维持电场的稳定；二是与带电粒子或分子相互作用，调节其迁移速度和方向。

迁移速度：带电粒子或分子在电场中的迁移速度取决于其电荷量、电场强度、电泳液中的电解质浓度和粘度等因素。通常，带有较多电荷的粒子或分子迁移速度较快。

迁移方向：带有正电荷的粒子或分子会向负极迁移，而带有负电荷的则向正极迁移。

电泳技术的详细步骤如下：

准备电泳槽：将电泳槽中的电解液加热至适当温度，并在正负电极位置装入电泳板。

准备样品：将待分离的样品处理成适当的电泳液，通常需要加入缓冲液和染料。

装样：将样品注入电泳槽中，通常通过吸管或微量注射器进行。

施加电场：关闭电泳槽盖，将正负电极连接至电源，施加适当电场。

进行电泳：根据需要设定电场强度、运行时间等参数，进行电泳过程。

结果分析：电泳结束后，观察电泳板上的带电粒子或分子的迁移情况，可以通过染色、显色等方法来观察和分析结果。

电泳技术广泛应用于生物学、生化学、分子生物学等领域，用于分离和分析蛋白质、核酸、多肽等生物分子，具有高分辨率、快速、简便等优点。

七、双向凝胶电泳技术的基本原理？

双向凝胶电泳由O'Farrel以及Klose和Scheele等人于1975年发明的，原理是第1向基于蛋白质的等电点不同用等电聚焦分离，具有相同等电点的蛋白质无论其分子大小，在电场的作用下都会用聚焦在某一特定位置即等电点处；第2向则按分子量的不同用SDS-PAGE分离，把复杂蛋白混合物中的蛋白质在二维平面上分开。

原理：

1、根据蛋白质的等电点（第一向）和分子量（第二向）的不同进行分离。

2、电泳后根据蛋白质的上样量对胶进行考马斯亮兰染色、银染或荧光染色，然后用相关软件对电泳图象进行分析。

八、区带电泳分析法的基本原理？

电泳法分离混合蛋白质的基本原理是根据蛋白质的电荷不同即酸碱性质不同分离蛋白质混合物的方法。

电泳：在外电场的作用下，带点颗粒将向着与其电性相反的电极移动，这种现象称为电泳。电泳技术可用于氨基酸、肽、蛋白质和核苷酸等生物分子的分析分离和制备。 区带电泳是由于在支持物上电泳蛋白质混合物被分离为若干区带。

电泳前用缓冲液浸润薄膜或滤纸等支持物或用缓冲液直接配置成凝胶，将待分离的蛋白质样品加在它的一端或中央，支持物的两端与电极连接，通电电泳。电泳完毕，各个组分分布在不同的区域，用显色剂（蛋白质可用考马斯亮蓝或氨基黑等染色）显色后可以显示出各个组分。

九、电泳法分离混合蛋白质的基本原理是什么？

电泳法分离混合蛋白质的基本原理是根据蛋白质的电荷不同即酸碱性质不同分离蛋白质混合物的方法。

电泳：在外电场的作用下，带点颗粒将向着与其电性相反的电极移动，这种现象称为电泳。电泳技术可用于氨基酸、肽、蛋白质和核苷酸等生物分子的分析分离和制备。 区带电泳是由于在支持物上电泳蛋白质混合物被分离为若干区带。

电泳前用缓冲液浸润薄膜或滤纸等支持物或用缓冲液直接配置成凝胶，将待分离的蛋白质样品加在它的一端或中央，支持物的两端与电极连接，通电电泳。电泳完毕，各个组分分布在不同的区域，用显色剂（蛋白质可用考马斯亮蓝或氨基黑等染色）显色后可以显示出各个组分。

氨基酸混合物特别是寡聚核苷酸混合物一次电泳往往不能完全分开。这种情况可以将第一次电泳分开的斑点通过支持介质间的接触印迹转移到第二个支持介质上，旋转90°，进行第二次电泳。这种方法称为双向电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳：以聚丙烯酰胺凝胶为支持物，一般制成凝胶柱或凝胶板，凝胶是由相连的两部分组成（小的部分是浓缩胶，大的部分为分离胶），这两部分凝胶的浓度、缓冲液组分和离子强度、pH以及电场强度都是不同的，即不连续性。电泳时样品首先在不连续的两相间积聚浓缩而成很薄的起始区带，然后再进行电泳分离。

电泳有三种物理效应：1、样品的浓度效应；2、凝胶对被分离分子的筛选效应；3、一般电泳分离的电荷效应。

毛细管电泳：高效毛细管电泳、毛细管区带电泳、自由溶液毛细管电泳、毛细管电泳，可分离氨基酸、肽、蛋白质、DNA片段和核酸以及多种小分子，也可用于手性化合物的分离。

等点聚焦（IEF）分离蛋白质混合物是在具有pH梯度的介质（如浓蔗糖溶液）中进行。在外电场作用下各种蛋白质将移向并聚焦在等于其等电点的梯度处，并形成一个很窄的区带。

pH梯度制作一般利用两性电解质，它是脂肪族多胺和多羧类的同系物，它们具有相近但不相同的解离常数和等电点。在外电场作用下，自然形成pH梯度。

层析聚焦：根据蛋白质的等电点差异分离蛋白质混合物的柱层析方法。

十、rna电泳和dna电泳的区别？

RNA分子有很多二级结构，需经变性剂处理，而DNA一般不需要变性处理

RNA电泳的电泳槽及缓冲液均需要确保无RNAase，有RNAase抑制剂处理过；而DNA相应的则需要DNAase抑制剂处理

所用的缓冲液不同

染色过程不同