elisa捕获法的原理？

一、elisa捕获法的原理？

elisa捕获法用于检测特异性的IgM。样品中针对某种抗原的特异性IgM和IgG常同时存在，IgG的存在将干扰IgM抗体的测定。

因此，测定IgM抗体需采用捕获法，先将样本中所有的IgM（特异性和非特异性IgM）捕获固定在固相上，去除IgG后，再测定特异性IgM。

二、elisa实验原理操作步骤？

　(二)　操作步骤

　　方法一　用于检测未知抗原的双抗体夹心法:

　　1.　包被：用0.05M PH9.�碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗涤缓冲液洗3次，每次3分钟。(简称洗涤，下同)。

　　2.　加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反应孔中，置37℃孵育1小时。然后洗涤。(同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔)。

　　3.　加酶标抗体：于各反应孔中，加入新鲜稀释的酶标抗体(经滴定后的稀释度)0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗涤。

　　4.　加底物液显色：于各反应孔中加入临时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。

　　5.　终止反应：于各反应孔中加入2M硫酸0.05ml。

　　6.　结果判定：可于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。也可测O・D值：在ELISA检测仪上，于450nm(若以ABTS显色，则410nm)处，以空白对照孔调零后测各孔O・D值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

三、elisa的原理和步骤？

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本（测定其中的抗体或抗原）与固相载体表面的抗原或抗体起反应。

操作步骤:

　1．从已平衡至室温的密封袋中取出试验所需板条，未用的板条和干燥剂请放回铝箔袋内压 实自封条，密封口袋，放回4℃。

2．空白孔加标准品和标本稀释液，其余相应孔中加标本或不同浓度标准品(100ul/孔)，用封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育90分钟。

3．提前20分钟准备生物素化抗体工作液。

4．洗板5次。

5．空白孔加生物素化抗体稀释液，其余孔加入生物素化抗体工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱孵育60分钟。

　6．提前20分钟准备酶结合物工作液。避光室温(22-25 ) ℃ 放置。

7．洗板5次。

8．空白孔加酶结合物稀释液，其余孔加入酶结合物工作液(100ul/孔)。用新封板胶纸封住反应孔，36℃孵箱，避光孵育30分钟。

9．打开酶标仪电源，预热仪器，设置好检测程序。

10．洗板5次。

11．加入显色底物(TMB)100ul/孔，避光36℃孵箱，避光孵育15分钟。

12．加入终止液100ul/孔, 混匀后即刻测量OD450值(3分钟内)。在仪器保存读数结果并打印一份纸质结果。

13．实验完毕后将未用完的试剂按规定的保存温度放回电冰箱保存至有效期结束。

四、ELISA法显色原理是啥？

正相反。

一般酶和抗体是化学键连接的。阳性对照中，抗体和抗原结合导致抗体的固定化（也就是说结合到板子上了），与抗体连接的酶就一并固定化了，所以再往酶标板中加入底物，酶就发挥作用显色了。阴性对照中，抗原没有，所以抗体不能固定化，随之没有酶的固定化，所以加入底物不显色。

五、elisa法基本原理？

ELISA的基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。

进行检测时，样品中的受检物质（抗原或抗体）与固定的抗体或抗原结合。通过洗板除去非结合物，再加入酶标记的抗原或抗体，此时，能固定下来的酶量与样品中被检物质的量相关。通过加入与酶反应的底物后显色，根据颜色的深浅可以判断样品中物质的含量，进行定性或定量的分析。

六、elisa洗涤液选择原理？

ELSIA就是靠洗涤来达到分离游离的和结合的酶标记物的目的。ELISA实验洗涤重点之洗涤液的选择：

1.某一项目的洗液建议使用该试剂盒内的洗液；

2.同一ELISA试剂盒洗液用完了，建议采用同一批号的洗液；

3.同一批号的洗液也用完了，建议采用同一项目的试剂洗液；

4.同一项目的洗液用完了，建议使用该项目其他厂家的洗液；

5.同一项目所有厂家都用完了，建议采用同一系列项目的洗液(比如甲乙丙丁戊庚肝抗体检测，属于肝炎系列，急用时可以暂时混用)；

6.不建议国产洗液与进口洗液混用，也更不建议不同系列项目的洗液混用，这两点都是因为洗液的配置成分不同，特别是不同项目的洗液(正规试剂厂家)，主要组分都不太一样。

注意：虽然对强阳性标本影响不是很大，但对于临界阳性阴性(灰区)标本影响较大，所以不提倡不同系列项目洗液混用。

七、elisa捕获法的操作原理？

ELISA，即酶联免疫吸附实验，其基本原理是将一定浓度的抗原或者抗体通过物理吸附的方法固定于聚苯乙烯微孔板表面，加入待检标本，通过酶标物显色的深浅间接反映被检抗原或者抗体的存在与否或者量的多少。ELISA技术作为免疫标记技术（包含免疫荧光技术，免疫放射技术，免疫酶技术和免疫胶体金技术）中的一种，已广泛应用于科研和临床实验中，具有快速，定性或者定量甚至定位的特点。

八、elisa间接竞争法原理？

其原理为使用酶符号的抗抗体（辣根过氧化物酶符号的兔抗人免疫球蛋白抗体）以检测与固相抗原结合的受检抗体（人免疫球蛋白），故称为间接法。本法主要用于对病原体抗体的检测而进行流行症的确诊。间接法的长处是只需改换包被抗原就可使用同一酶标抗抗体建立检测相应抗体的方法。

九、ELISA的实验原理是什么？

ELISA实验原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合,此种结合不会改变抗体的免疫学特性,也不影响酶的生物学活性。

酶标记抗体可与吸附在固相载体上的抗原或抗体发生特异性结合。

滴加底物溶液后,底物可在酶作用下使其所含的供氢体由无色的还原型变成有色氧化型,出现颜色反应。

因此,可通过底物的颜色反应来判定有无相应的免疫反应,颜色反应的深浅与标本中相应抗体或抗原的量呈正比。

此种显色反应可通过ELISA检测仪进行定量测定,这样就将酶化学反应的敏感性和抗原抗体反应的特异性结合起来,使ELISA方法成为一种既特异又敏感的检测方法。

十、elisa试剂盒检测原理

在生物科技领域，ELISA试剂盒检测原理是一种常用且重要的技术方法，用于检测和测量生物体内特定抗体或抗原的存在。ELISA代表"酶联免疫吸附测定"（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），它结合了免疫学和生物化学的原理，提供了一种敏感且特异性高的方法来定量检测目标分子。

ELISA试剂盒检测主要通过抗体与抗原之间的特异性结合来实现。ELISA试剂盒通常包含固定在试剂盒表面的抗原或抗体以及用于检测和测量的酶。以下是ELISA试剂盒检测原理的详细步骤：

1. 表面固定抗原或抗体

首先，在试剂盒的微孔板表面固定抗原或抗体。这些抗原或抗体能够特异性结合目标分子，它们会和样本中的目标分子发生特异性的结合。

2. 样本加入与洗涤

将待测样本加入到微孔板中，样本中的目标分子将与固定在表面的抗原或抗体发生结合反应。待测样本可以是血清、尿液、唾液等生物体内液体样本。为了去除非特异性结合的物质，需要进行洗涤步骤。

3. 二抗加入与洗涤

接下来，将与目标分子特异性结合的二抗加入到微孔板中。二抗是抗体的抗体，能够特异性地与目标分子上结合的抗体发生结合反应。二抗通常被标记有酶，例如辣根过氧化物酶（HRP）。

4. 底物加入

添加含有特定底物的试剂，该底物能够与酶发生反应产生可测量的信号。常用的底物是硫酸碘化苯胸腺嘧啶（TMB），在酶的作用下，它会被氧化成蓝色产物。

5. 信号测定与分析

测定底物反应生成的信号，可以通过比色法、荧光法或发光法进行。这些方法可以测量信号的强度，从而确定目标分子在样本中的存在量。测定后的结果可以通过仪器或人工读取，通常通过对照样品进行标定，比较样品的信号强度来进行定量分析。

ELISA试剂盒检测原理的优点是其高度特异性和敏感性。它可以检测非常低浓度的目标分子，并且在广泛的实验室应用中被广泛接受。由于其简单且相对快速的操作，ELISA试剂盒检测也被广泛应用于医学诊断、药物研发和生物学研究中。

总结而言，ELISA试剂盒检测原理是一种重要的生物技术方法，利用特异性结合反应来检测和测量生物体内特定抗体或抗原的存在。通过固定抗原或抗体于微孔板表面，配合样品的加入与洗涤、特异性二抗的加入、底物的加入以及信号测定与分析等步骤，ELISA试剂盒检测提供了一种准确、灵敏且便捷的检测方法。其广泛应用于医学诊断、药物研发和生物学研究等领域，正为生命科学的进展做出重要贡献。

--- 在生物科技领域，ELISA试剂盒检测原理是一种常用且重要的技术方法，用于检测和测量生物体内特定抗体或抗原的存在。ELISA代表"酶联免疫吸附测定"（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay），它结合了免疫学和生物化学的原理，提供了一种敏感且特异性高的方法来定量检测目标分子。 ELISA试剂盒检测主要通过抗体与抗原之间的特异性结合来实现。ELISA试剂盒通常包含固定在试剂盒表面的抗原或抗体以及用于检测和测量的酶。以下是ELISA试剂盒检测原理的详细步骤： ## 1. 表面固定抗原或抗体 首先，在试剂盒的微孔板表面固定抗原或抗体。这些抗原或抗体能够特异性结合目标分子，它们会和样本中的目标分子发生特异性的结合。 ## 2. 样本加入与洗涤 将待测样本加入到微孔板中，样本中的目标分子将与固定在表面的抗原或抗体发生结合反应。待测样本可以是血清、尿液、唾液等生物体内液体样本。为了去除非特异性结合的物质，需要进行洗涤步骤。 ## 3. 二抗加入与洗涤 接下来，将与目标分子特异性结合的二抗加入到微孔板中。二抗是抗体的抗体，能够特异性地与目标分子上结合的抗体发生结合反应。二抗通常被标记有酶，例如辣根过氧化物酶（HRP）。 ## 4. 底物加入 添加含有特定底物的试剂，该底物能够与酶发生反应产生可测量的信号。常用的底物是硫酸碘化苯胸腺嘧啶（TMB），在酶的作用下，它会被氧化成蓝色产物。 ## 5. 信号测定与分析 测定底物反应生成的信号，可以通过比色法、荧光法或发光法进行。这些方法可以测量信号的强度，从而确定目标分子在样本中的存在量。测定后的结果可以通过仪器或人工读取，通常通过对照样品进行标定，比较样品的信号强度来进行定量分析。 ELISA试剂盒检测原理的优点是其高度特异性和敏感性。它可以检测非常低浓度的目标分子，并且在广泛的实验室应用中被广泛接受。由于其简单且相对快速的操作，ELISA试剂盒检测也被广泛应用于医学诊断、药物研发和生物学研究中。 总结而言，ELISA试剂盒检测原理是一种重要的生物技术方法，利用特异性结合反应来检测和测量生物体内特定抗体或抗原的存在。通过固定抗原或抗体于微孔板表面，配合样品的加入与洗涤、特异性二抗的加入、底物的加入以及信号测定与分析等步骤，ELISA试剂盒检测提供了一种准确、灵敏且便捷的检测方法。其广泛应用于医学诊断、药物研发和生物学研究等领域，正为生命科学的进展做出重要贡献。