是的, DAB即3,3N-Diaminobenzidine Tertrahydrochloride,是辣根过氧化物酶的常用底物。在辣根过氧化物酶的催化下,DAB会产生棕色沉淀。该棕色沉淀不溶于水和乙醇。因此在DAB显色后,还可以使用溶于乙醇的染料进行后续染色。操作时,须戴手套
染色时间根据情况调整,不能过长,以免造成过度染色
如果封闭欠佳,易造成背景颜色过深
染色液具有毒性或刺激性
DAB显色无需避光,一般5-15分钟即可,根据组织部位不同有差异。
DBA显色:DAB是显色剂,有毒,所以操作是最好带口罩和手套。它主要和蛋白质的NH2或SH基团结合,形成稳定的nn键或ns键;
然后DAB中的显色基团就能显示出颜色,标记到已经暴露的蛋白质上,从而显示我们目标细胞的蛋白质分布及种类等。
原理:是应用免疫学基本原理——抗原抗体反应,即抗原与抗体特异性结合的原理,通过化学反应使标记抗体的显色剂(荧光素、酶、金属离子、同位素)显色来确定组织细胞内抗原(多肽和蛋白质),对其进行定位、定性及相对定量的研究方法。
DAB试剂盒的用处:试剂盒的成分根据各个公司有所不同,但一般包括DAB原液,稀释剂和信号放大剂。
DAB是过氧化物酶重要的显色底物之一,能被催化生成水不溶性的棕黄色产物,能直观地观察到,适用于各种斑点检测和免疫组化中的染色步骤。
建议可以直接选用absin品牌的DAB试剂盒,试剂盒里的选色液都是配置好直接用的,可以根据实验需要选择不同的颜色。
DAB显色液配制
10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基联苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,显色时加入5-10mL 30%H2O2 混匀后立即使用
按此比例配置,不需要稀释。
显色
准备好含有待测蛋白的固相膜:包括电泳、转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤。
DAB染色液用于免疫组化染色,应用在Dako 自动染色系统上。
DAB染色液的使用方法
1.DAB显色液配制
10mM Tris-HCl (pH7.6) 9mL +DAB (diaminobezidin 3,3-二氨基联苯胺) +0.3%(W/V) NiCl2 或CoCl2 1mL ,显色时加入5-10mL 30%H2O2 混匀后立即使用
2. 显色
准备好含有待测蛋白的固相膜:包括电泳、转印、封阻、一抗(或生物素)处理、辣根过氧化酶(HRP)标记的二抗(或链霉亲和素)处理、清洗等步骤。
3.加入适量的DAB显色液,铺满整个固相膜表面(可按比例增减)。
4. 置于平式摇荡仪上,在室温下孵育2至5分 钟,避免光照(暗室操作),直至棕褐色沉淀出现。
5.用镊子夹起固相膜,放进无离子水里清洗。
6.空气中晾干。
7. 拍照记录 。
淀粉遇碘显蓝色.因此,先用笔蘸淀粉溶液在纸上作画,再喷以碘液,便有显色反应发生.
酸性高锰酸钾溶液易被还原而褪色.
酚酞遇碱显蓝色和石蕊的"酸红碱蓝"也属氧化还原反应.
生成有色物质,或有荧光物质,可以显色。
有机物的显色原理与有机物中的共轭体系有关系。
比如偶氮化合物中学多都是用来作为染料或指示剂的,这些偶氮化合物中常含有氮氮双键、苯环等共轭体系,当有不同波长的光照射到共轭体系上时,共轭体系会吸收某段波长的能量,从而显现出与吸收的波长显示的颜色互补的颜色,这样有机物就显现出颜色了
的配制方法
10 g 磷钼酸+100 mL 乙醇
淡黄色,久置变为浅绿色,不影响使用。浸板或喷板,加热,浅黄色背景,还原性物质显蓝绿色斑点,如果斑点太浓,可能显深黄色。
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