制备单克隆抗体的2个原理？

一、制备单克隆抗体的2个原理？

哈哈~我们刚考到这题

原理：

B淋巴细胞在抗原的刺激下，能够分化、增殖形成具有针对这种抗原分泌特异性抗体的能力。B细胞的这种能力和量是有限的，不可能持续分化增殖下去，因此产生免疫球蛋白的能力也是极其微小的。将这种B细胞与非分泌型的骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞，再进一步克隆化，这种克隆化的杂交瘤细胞是既具有瘤的无限生长的能力，又具有产生特异性抗体的B淋巴细胞的能力，将这种克隆化的杂交瘤细胞进行培养或注入小鼠体内即可获得大量的高效价、单一的特异性抗体。这种技术即称为单克隆抗体技术。

过程

1）免疫脾细胞的制备 制备单克隆抗体的动物多采用纯系 Balb/c小鼠。免疫的方法取决于所用抗原的性质。免疫方法同一般血清的制备，也可采用脾内直接免疫法。

2）骨髓瘤细胞的培养与筛选 在融合前，骨髓瘤细胞应经过含8-AG的培养基筛选，防止细胞发生突变恢复HGPRT的活性（恢复HGPRT的活性的细胞不能在含8-AG的培养基中存活）。骨髓瘤细胞用10%小牛血清的培养液在细胞培养瓶中培养，融合前24h换液一次，使骨髓瘤细胞处于对数生长期。

3）细胞融合的关键:

1技术上的误差常常导致融合的失败。例如，供者淋巴细胞没有查到免疫应答。这必然要失败的。

2融合试验最大的失败原因是污染，融合成功的关键是提供一个干净的环境，以及适宜的无菌操作技术。

4）阳性克隆的筛选 应尽早进行。通常在融合后10天作第一次检测，过早容易出现假阳性。检测方法应灵敏、准确、而且简便快速。具体应用的方法应根据抗原的性质，以及所需单克隆抗体的功能进行选择。常用的方法有 RIA法、 ELISA法和免疫荧光法等。其中ELISA法最简便，RIA法最准确。阳性克隆的筛选应进行多次，均阳性时才确定为阳性克隆进行扩增。

5）克隆化 克隆化的目的是为了获得单一细胞系的群体。克隆化应尽早进行并反复筛选。这是因为初期的杂交瘤细胞是不稳定的，有丢失染色体的倾向。反复克隆化后可获得稳定的杂交瘤细胞株。克隆化的方法很多，而最常用的是有限稀释法。

（1）显微操作法：在显微镜下取单细胞，然后进行单细胞培养。这种方法操作复杂，效率低，故不常用。

（2）有限稀释法：将对数生长期的杂交瘤细胞用培养液作一定的稀释后，按每孔1个细胞接种在培养皿中，细胞增值后成为单克隆细胞系。第一次克隆化时加一定量的饲养细胞。由于第一次克隆化生长的细胞不能保证单克隆化，所以为获得稳定的单克隆细胞株需经2～3次的再克隆才成。应该注意的是，每次克隆化过程中所有有意义的细胞都应冷冻保存，以便重复检查，避免丢失有意义的细胞。

（3）软琼脂法：将杂交瘤细胞稀释到一定密度，然后与琼脂混悬。在琼脂中的细胞不能自由移动，彼此互不相混，从而达到单细胞培养的目的。但此法不如有限稀释法好。

（4）荧光激光细胞分类法：用抗原包被的荧光乳胶微球标记杂交瘤细胞，然后根据抗原与杂交瘤细胞结合的特异性选出细胞，并进行单细胞培养。

6）细胞的冻存与复苏

7）大规模单克隆抗体的制备 选出的阳性细胞株应及早进行抗体制备，因为融合细胞随培养时间延长，发生污染、染包体丢失和细胞死亡的机率增加。抗体制备有两种方法。一是增量培养法，即将杂交瘤细胞在体外培养，在培养液中分离单克隆抗体。该法需用特殊的仪器设备，一般应用无血清培养基，以利于单克隆抗体的浓缩和纯化。最普遍采用的是小鼠腹腔接种法。选用BALB/c小鼠或其亲代小鼠，先用降植烷或液体石蜡行小鼠腹腔注射，一周后将杂交瘤细胞接种到小鼠腹腔中去。通常在接种一周后即有明显的腹水产生，每只小鼠可收集5～10ml的腹水，有时甚至超过40ml。该法制备的腹水抗体含量高，每毫升可达数毫克甚至数十毫克水平。此外，腹水中的杂蛋白也较少，便于抗体的纯化。

意义：

用于以下各种生命科学实验并具有医用价值

（1）沉淀反应：Precipitation reaction

（2）凝集实验：haemaglutination

（3）放射免疫学方法检测免疫复合物

（4） 流式细胞仪：用于细胞的分型和细胞分离。

（5）ELISA 等免疫学检测

（6）BIAcore biosensor:检测Ab-Ag或与蛋白的

亲和力 。

(7) 免疫印记（western blotting)

（8） 免疫沉淀：

（9） 亲和层析：分离蛋白质

（10） 磁珠分离细胞

（11）临床疾病的诊断和治疗；

二、单克隆抗体的制备原理是什么？

单克隆抗体技术原理如下：

由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体，称为单克隆抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。用具备这种特性的单个杂交瘤细胞培养成细胞群，可制备针对一种抗原表位的特异性抗体即单克隆抗体。

单克隆抗体技术可用于探讨①蛋白质的精细结构；②淋巴细胞亚群的表面新抗原；③组织相容性抗原；④激素和药物的放射免疫（或酶免疫）分析；⑤肿瘤的定位和分类；⑥纯化微生物和寄生虫抗原；⑦免疫治疗和与药物结合的免疫-化学疗法 (“导弹”疗法,利用单克隆抗体与靶细胞特异性结合，将药物带至病灶部位。因此，单克隆抗体可直接用于人类疾病的诊断、预防、治疗以及免疫机制的研究，为人类恶性肿瘤的免疫诊断与免疫治疗开辟了广阔前景。

三、单克隆抗体的制备过程？

主要包括以下步骤：

1.免疫原制备：首先需要制备纯化免疫原，通常可以是一种蛋白质、多肽、细胞表面分子等。免疫原的纯化需要充分保证其质量和纯度，以提高单克隆抗体的制备成功率。

2.免疫动物注射：将制备好的免疫原注射到小鼠、兔子等免疫动物体内，以激发其免疫系统产生抗体。通常需要进行多次免疫注射，以提高抗体的产生量和质量。

3.获得B细胞：从免疫动物的脾脏或骨髓中提取B细胞，用于后续的单克隆抗体制备。

4.细胞融合：将提取的B细胞与髓样瘤细胞融合，产生杂交瘤细胞。髓样瘤细胞可以不断增殖，提供单克隆抗体的大量生产量，而B细胞则提供单克隆抗体的特异性。

5.筛选和克隆：使用特定的筛选方法，筛选出产生单一克隆抗体的杂交瘤细胞，称为“单克隆细胞系”。然后需要对单克隆细胞系进行克隆，以扩大单克隆抗体的产量。

6.单克隆抗体生产和纯化：对单克隆细胞系进行培养，收集单克隆抗体并进行纯化，以获得高纯度的单克隆抗体。

总体来说，单克隆抗体的制备过程相对复杂，需要耗费较长时间和大量的实验操作。但由于其具有高度的特异性和稳定性，因此在生物医学研究、诊断和治疗等领域都有着广泛的应用。

四、单克隆抗体的制备步骤？

单克隆抗体制备的基本流程

（1）免疫动物 免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的过程。一般选用6-8周龄雌性Balb/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。（2）细胞融合 采用眼球摘除放血法处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

（3）选择性培养 选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

（4）杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化 在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。经过鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

五、制备单克隆抗体的过程？

制备单克隆抗体通常需要经过以下步骤：

1. 抗原制备：首先需要准备抗原，一般可以是蛋白质、多肽、细胞膜分子等。抗原的选择取决于研究的目的和对抗体特异性的要求。

2. 免疫动物：将抗原注射到小鼠、兔子等动物体内，刺激其产生免疫反应。

3. 获得抗血清：采集免疫动物的血液，离心获得血清。血清中含有大量多克隆抗体，但各个抗体来源不同，特异性可能较低。

4. 筛选单克隆细胞：通过细胞融合或者其他技术，获得可增殖的杂交瘤细胞。对于杂交瘤进行筛选，最终能够得到只产生某种特定抗体的单克隆细胞。

5. 生产单克隆抗体：将单克隆细胞大规模培养，收集培养液中的单克隆抗体。

6. 纯化和检测：将收集到的抗体进行纯化，并进行特异性和亲和力等性质检测。

总之，制备单克隆抗体需要经过一系列复杂的步骤，并且需要耗费大量的时间和精力。

六、高中生物！制备单克隆抗体原理？

从经过特异性免疫的实验动物体内提取B细胞

用动物细胞融合的方法将B细胞与骨髓瘤细胞融合成杂交瘤细胞

用特定的选择性培养基筛选出能够无限增殖并产生特异性抗体的杂交瘤细胞

进行体内或体外培养。体内培养就是将杂交瘤细胞注入实验动物腹腔，将来从腹水中提取。体外培养，就是利用动物细胞培养的方法，将来从培养液中提取

单克隆抗体的优点是：特异性强、灵敏度高，并可大量制备

七、单克隆抗体制备过程？

单克隆抗体的制备过程一般包括以下步骤：

1. 免疫动物的选择：选择一个适当的动物（例如小鼠、兔子、鸡等）进行免疫，使其产生多种不同的抗体。

2. 免疫原的准备：准备一种目标抗原，可以是蛋白质、病毒、细菌等。

3. 免疫：将免疫动物注射免疫原，促使其产生不同的抗体。

4. 混合瘤细胞的制备：从免疫动物中采集淋巴细胞和肿瘤细胞，混合后制成混合瘤细胞。

5. 细胞融合：使用聚乙二醇等化学物质使混合瘤细胞融合，形成单克隆细胞。

6. 细胞筛选：经克隆化的细胞存活下来后筛选，筛选出生产单一种抗体的单克隆细胞。

7. 抗体生产：将单克隆细胞培养，并收集其产生的单克隆抗体。

8. 纯化和鉴定：对单克隆抗体进行纯化和鉴定，以确保其纯度和特异性。

整个过程需要技术精湛，严格操作，通常需要几个月甚至更长时间才能获得一次满意的结果。

八、简述人工制备单克隆抗体的方法？

单克隆抗体是由单一B细胞克隆产生的高度均一、仅针对某一特定抗原表位的抗体。通常采用杂交瘤技术来制备，杂交瘤（hybridoma）抗体技术是在细胞融合技术的基础上，将具有分泌特异性抗体能力的致敏B细胞和具有无限繁殖能力的骨髓瘤细胞融合为B细胞杂交瘤。

制备过程:

1. 免疫动物

免疫动物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠产生致敏B淋巴细胞的 过程。 一般选用6-8周龄雌性BALB/c小鼠，按照预先制定的免疫方案进行免疫注射。 抗原通过血液循环或淋巴循环进入外周免疫器官，刺激相应B淋巴细胞克隆，使其活化、增殖，并分化成为致敏B淋巴细胞。

2.细胞融合

采用二氧化碳气体处死小鼠，无菌操作取出脾脏，在平皿内挤压研磨，制备脾细胞悬液。 将准备好的同系骨髓瘤细胞与小鼠脾细胞按一定比例混合，并加入促融合剂聚乙二醇。在聚乙二醇作用下，各种淋巴细胞可与骨髓瘤细胞发生融合，形成杂交瘤细胞。

3.选择性培养

选择性培养的目的是筛选融合的杂交瘤细胞，一般采用HAT选择性培养基。在HAT培养基中，未融合的骨髓瘤细胞因缺乏次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，不能利用补救途径合成DNA而死亡。 未融合的淋巴细胞虽具有次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，但其本身不能在体外长期存活也逐渐死亡。 只有融合的杂交瘤细胞由于从脾细胞获得了次黄嘌呤-鸟嘌呤-磷酸核糖转移酶，并具有骨髓瘤细胞能无限增殖的特性，因此能在HAT培养基中存活和增殖。

4.杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化

在HAT培养基中生长的杂交瘤细胞，只有少数是分泌预定特异性单克隆抗体的细胞，因此，必须进行筛选和克隆化。通常采用有限稀释法进行杂交瘤细胞的克隆化培养。采用灵敏、快速、特异的免疫学方法，筛选出能产生所需单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞，并进行克隆扩增。经过全面鉴定其所分泌单克隆抗体的免疫球蛋白类型、亚类、特异性、亲和力、识别抗原的表位及其分子量后，及时进行冻存。

5.单克隆抗体的大量制备

单克隆抗体的大量制备主要采用动物体内诱生法和体外培养法。

(1)体内诱生法 取BALB/c小鼠，首先腹腔注射0.5ml液体石蜡或降植烷进行预处理。1-2周后，腹腔内接种杂交瘤细胞。杂交瘤细胞在小鼠腹腔内增殖，并产生和分泌单克隆抗体。约1-2周，可见小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可获得大量单克隆抗体。

(2)体外培养法 将杂交瘤细胞置于培养瓶中进行培养。在培养过程中，杂交瘤细胞产生并分泌单克隆抗体，收集培养上清液，离心去除细胞及其碎片，即可获得所需要的单克隆抗体。但这种方法产生的抗体量有限。各种新型培养技术和装置不断出现，大大提高了抗体的生产量。

九、单克隆抗体的制备流程是怎样的？

1.对小鼠注射特定的抗原蛋白,使小鼠产生免疫反应；

2.得到相应的B淋巴细胞；

3.将小鼠骨髓瘤细胞与B淋巴细胞融合,再用特定的选择培养基进行筛选；

4.在该培养基上,未融合的亲本细胞和融合的具有同种核的细胞都会死亡,只有融合的杂种细胞才能生长（这种杂种细胞的特点是既能迅速大量繁殖又能产生专一的抗体）；

5.对上述杂交瘤细胞还需进行克隆化培养和抗体检测,经多次筛选,就可获得足量的能分泌所需抗体的细胞；

6.最后,将杂交瘤细胞在体外条件下做大规模培养,或注射到小鼠腹腔内增殖,这样,从细胞培养液或小鼠腹水中,就可以提取出大量的单克隆抗体了!

十、制备单克隆抗体最常用的动物是？

最常用的动物是小白鼠。因为小鼠免疫后更容易产生特异性的B淋巴细胞，由B淋巴细胞产生特异性的单克隆抗体。