逆转录pcr详细步骤？

一、逆转录pcr详细步骤？

逆转录PCR是在实验室进行的一种分子生物学技术，其详细步骤如下：1. 将转录酶、RNA模板、引物和反应缓冲液混合，生成反应体系。2. 在反应体系中加入逆转录酶，使RNA模板转录成cDNA。3. 在反应结束后，加入热稳定DNA聚合酶、引物和反应缓冲液，生成PCR反应体系。4. 在反应体系中进行PCR扩增，得到所需的DNA产物。逆转录PCR是一种将RNA模板逆转录为cDNA，并通过PCR扩增DNA的技术，其主要用于检测基因的表达水平。同时，逆转录PCR也可以用于病毒等抗原的检测，具有很高的敏感性和特异性。

二、逆转录pcr和实时荧光pcr的区别？

原理不同：荧光定量pcr实时监测与dna结合的荧光染料激发的荧光；逆转录pcr通过检测插入dna中核算染料的量来测定pcr最终产物量,一般是紫外光.

反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求,一般为100-300bp；普通定量可以扩增长点的片段.如果不需要检测产物分子量大小,荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析,逆转录pcr必须电泳.

结果：荧光定量可以实现精确定量,普通pcr则不行.荧光定量体现可以看到整个扩增过程,可以看到扩增效率,溶解温度,直接得到的标准曲线等,这些是普通pcr无法实现的.

三、pcr逆转录产物如何检测？

pcr逆转录产物是DNA，用DND分子杂交技术进行检测。

逆转录PCR（reverse transcription PCR）或者称反转录PCR（reverse transcription-PCR, RT-PCR），是聚合酶链式反应（PCR）的一种广泛应用的变形。它是一种以 RNA 为样本，RNA链被逆转录成为互补DNA（cDNA），再以此为模板通过 PCR 进行 DNA 扩增。

四、逆转录原理？

逆转录（reverse transcription）是以RNA为模板合成DNA的过程，即RNA指导下的DNA合成。此过程中，核酸合成与转录（DNA到RNA）过程与遗传信息的流动方向（RNA到DNA）相反，故称为逆转录。

五、PCR原理？

PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。

双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。

六、ABI 7500 PCR仪可以做逆转录吗？

可以，只要能够满足精确的温度控制就可以。根据所用逆转录酶的反应温度，选择37C,42C或者50C直接进行逆转录反应就可以了。所以PCR仪没有任何问题的。

七、pcr逆转录要上下游引物吗？

逆转录是不需要上下游引物的，可以选择随机引物，也可以用oligo引物，这些都是反转录试剂盒里带的。

八、逆转录酶原理？

原理：提取组织或细胞中的总RNA，以其中的mRNA作为模板，采用Oligo或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增，而获得目的基因或检测基因表达。过程：在逆转录酶作用下以dNTP为底物，RNA为模板，tRNA为引物。

　　按5′→3′方向，合成一条与RNA模板互补的DNA单链。然后它与RNA模板形成RNA DNA杂交体，随后又在反转录酶的作用下，水解掉RNA链，再以此DNA为模板合成第二条DNA。逆转录过程是病毒的复制形式之一，如RNA病毒中的逆转录病毒，DNA病毒中的嗜肝DNA病毒和花椰菜花叶病病毒的复制均需要经过逆转录。

　　逆转录过程在真核细胞中也同样存在，例如逆转座子和端粒DNA的延长均存在逆转录过程，需逆转录酶的催化。逆转录过程的揭示是分子生物学研究中的重大发现，是对中心法则的重要修正和补充。

   人们通过体外模拟该过程，以样本中提取的mRNA为模板，在逆转录酶的作用下，合成出互补的cDNA，构建cDNA文库，并从中筛选特异的目的基因。该方法已成为基因工程技术中最常用的获得目的基因的策略之一。

九、Pcr实验原理？

PCR的原理是利用DNA在体外摄氏95°高温时变性会变成单链，低温（经常是60°C左右）时引物与单链按碱基互补配对的原则结合，再调温度至DNA聚合酶最适反应温度（72°C左右），DNA聚合酶沿着磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互补链。

PCR最有价值的应用领域就是对感染疾病的诊断。理论上，只要样本有一个病原体存在，PCR就可以检测到。

在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

但是，DNA聚合酶在高温时会失活，因此，每次循环都得加入新的DNA聚合酶，不仅操作烦琐，而且价格昂贵，制约了PCR技术的应用和发展。

十、pcr工作原理？

PCR工作原理是依赖于与靶序列的寡核苷酸引物。PCR技术其实是一种体外的DNA产生扩增的技术，是在模板DNA、引物和4种脱氧核苷酸存在的条件下，依赖于DNA聚合酶的酶促合反应，将需要被扩增的DNA的片段与其两侧互补的寡核苷酸链引物经过一系列反应的多次循环，从而就可以在较短的时间内获得我们所需的特定的基因片段。