分离纯化微生物的关键？

一、分离纯化微生物的关键？

关键是防止外来杂菌入侵，灭菌，消毒。

分离纯化大肠杆菌的关键步骤是接种，该步骤常用的方法有两种：平板划线法和稀释涂布平板法，其中稀释涂布平板法是将菌液进行一系列的梯度稀释，然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固定培养基的表面进行培养。

释义

纯培养最重要的是在于微生物的生理研究，方法是依靠灭菌和分离，是由巴斯德（L．Pasteur）和柯赫（R．Koch）建立起来的。在自然界中，有的培养条件很困难，特别是具有密切共生关系的生物及进行寄生性营养的生物；也有一些在理论上不可能进行纯粹培养的生物。

如果在一个菌落中所有细胞均来自于一个亲代细胞，那么这个菌落称为纯培养（Pure culture）。在进行菌种鉴定时，所用的微生物一般均要求为纯的培养物。

二、黑曲霉分离纯化的原理？

黑曲霉广泛分布于世界各地的粮食、植物性产品和土壤中。黑曲霉的最适温度为37°C，黑曲霉对营养要求较低，只要培养基中含有碳源、氮源及磷、钾、镁、硫等元素即能生长良好，实验中采用查氏培养基进行培养。

黑曲霉的菌落蔓延迅速，但生长稍局限，菌丝初为白色，后变成鲜黄色直至黑色厚绒状，背面无色或中央略带黄褐色。顶部形成球形顶囊，其上全面覆盖-层梗基和一层小梗，小梗双层褐色，梗基较短，上长有成串褐黑色的球状分生孢子。孢子直径2.5~4.0μm。分生孢子头球状，直径700~800μm，褐黑色。

黑曲霉的个体形态和菌落形态都比较特殊，容易分辨，可利用平板划线法或稀释涂布法，得到单菌落，并结合显微镜检测，多步鉴定、纯化，得到的纯的菌种。另外，黑曲霉在pH=2. 0~2.5时，有利于合成柠檬酸，在pH=2.5~ 6.5范围内以菌体生长为主，最适生长pH为5.0 ~6.0。实验过程中，利用黑曲霉在pH=2. 5左右的培养基中产生柠檬酸，结合大肠杆菌的IMVIC 实验中的柠檬酸实验，对其进行进一步鉴定。

三、苯甲醇的分离纯化原理？

根据苯甲酸钠、苯甲醇在水中和在乙醚中的溶解度不同。苯甲醇在乙醚中易溶，苯甲酸钠易溶于水。用乙醚可在反应混合物中萃取苯甲醇，再经蒸馏除去萃取剂乙醚，便可得到产物苯甲醇；将萃取后的水溶液酸化就得到苯甲酸固体，经抽滤，就可以得到另一产物苯甲酸。

四、微生物分离纯化常用的方法有哪些？

稀释倒平皿法 平板划线法 单细胞挑取法 利用选择培养基分离法

1、若是你不知道你所要纯化的微生物的特征，最简单的不知道它的菌落特征和形态大小，那现根据你要分离菌的特性，找适合的初筛培养基，找到你要纯化的菌。如纤维素菌，你在培养基中加纤维素粉或CMC-Na作碳源，这样就可以筛选出分解纤维素的菌。然后再用下面的方法继续纯化。

2、若你知道目标菌的形态，可以直接挑混合菌划平板，直到长出当个菌落，并且在镜下没有杂菌即可；或者挑菌稀释涂布得到当个菌落也行。

五、RNA 的分离纯化的原理和应用？

研究基因的表达和调控时常常要从组织中分离和纯化RNA。RNA质量的高低常常影响cDNA库，RT-PCR和Northern Blot等分子生物学实验的成败。Trizol是一种新型总RNA抽提试剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。

RNase酶非常稳定，是导致RNA降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是RNase完全失活。

六、微生物的分离和微生物的纯化。有什么区别？

分离是有意识的，通过某种方法，吧两种或者多种的微生物分开，多用的是培养基的选择性。

纯化是指将一定的微生物去除杂菌，获得纯度更高的活性更好的微生物菌种。

某种程度上来说，两件事所需要的方法可能相同

七、微生物的分离纯化实验需要注意什么？

酶分离纯化的一般原则是：保证酶的活性正常保持，不失活，避免在极端条件下操作，如有必要还要添加一定的保护剂。

　　虽然酶大多是蛋白质，但少数具有生物催化功能的分子并非为蛋白质，有一些被称为核酶的RNA分子也具有催化功能。此外，通过人工合成所谓人工酶也具有与酶类似的催化活性，包括人工合成的DNA。有人认为酶应定义为具有催化功能的生物大分子，即生物催化剂。

　　酶的催化活性会受其他分子影响：抑制剂是可以降低酶活性的分子；激活剂则是可以增加酶活性的分子。有许多药物和毒药就是酶的抑制剂。酶的活性还可以被温度、化学环境（如pH值）、底物浓度以及电磁波（如微波）等许多因素所影响。

八、微生物的分离与纯化的常用方法有哪些？

主要有1、稀释倒平板法 首先把微生物悬液作一系列的稀释（如1:10、1:100、1:1000、1:10000），然后分别取不同稀释液少许，与已熔化并冷却至50℃左右的琼脂培养基混合，摇匀后，倾入灭过菌的培养皿中，待琼脂凝固后制成可能含菌的琼脂平板，保温培养一定时间即可出现菌落。

如果稀释得当，在平板表面或琼脂培养基中就可出现分散的单个菌落，这个菌落可能就是由一个细菌细胞繁殖形成的。

随后挑取该单个菌落，或重复以上操作数次，便可得到纯培养。

2.、稀释涂布平板法 将已熔化的培养基倒入无菌平皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量的微生物悬液滴加在平板表面，再用无菌玻璃涂棒将菌液均匀分散至整个平板表面，经培养后挑取单个菌落。

3、平板划线法 将微生物样品在固体培养基表面多次作“由点到线”稀释而达到分离。

4、稀释摇管法 先将一系列盛无菌琼脂培养基的试管加热使琼脂熔化后冷却并保持在50℃左右，将待分离的材料用这些试管进行梯度稀释，试管迅速摇动均匀，冷凝后，在琼脂柱表面倾倒一层灭菌液体石蜡和固体石蜡的混合物，将培养基和空气隔开。

九、分离纯化的方法？

1、吸收法：常用于气体的净化和干燥，可根据被提纯气体中所含杂质气体的性质，选择适当的固体或溶液作为吸收剂。如Cl2中混有的HCl气体可通过饱和食盐水除去，常用装置是洗气瓶。

2、沉淀法：在被提纯的物质中加入适量试剂使其与杂质反应，生成沉淀后再过滤除去。如KNO3中含有的少量Ba(NO3)2，可用适量的K2SO4除去。

3、气体法：根据物质中所含杂质的性质加入合适的试剂，将杂质转化为气体而除去。如KCl中混有的少量K2CO3，可加适量盐酸除去。

4、转化法：利用化学反应，加入适当的试剂或采用某种条件（如加热），使物质中的杂质转化为被提纯物质。

5、溶解法：对于固体物质可选择适当的试剂将杂质溶解，然后过滤除去。如Mg(OH)2中混有Al(OH)3，可用过量NaOH溶液除去，然后洗涤Mg(OH)2沉淀即可。

6、氧化还原法：对混合物中含有的还原性杂质，可加入适当氧化剂将其氧化为被提纯物质；对混合物中含有的氧化性杂质，可加入适当还原剂将其还原为被提纯物质。如FeCl3中含有FeCl3，加入铁粉、振荡过滤，即可除去FeCl3；FeCl3中含有FeCl2，滴入双氧水，可将FeCl2转化成FeCl3而又不引入新的杂质。

十、分离纯化方法？

分离纯化是将中药提取液与药渣、沉淀物和固体杂质进行分离,进而采用先进、合理的分离纯化工艺除去无效成分,保留有效成分和辅助成分的技术。常用的分离方法有滤过分离、沉降分离和离心分离。

由于中药成分复杂,含量有高有低,分离纯化方法的选用,应根据药材所含成分理化性质、制剂所选剂型及成型工艺等要求综合考虑,并需进行必要的工艺验证才能确定。根据中药中有效成分溶于水或溶于乙醇的性质,中药提取分离常用的方法为水提醇沉法和醇提水沉法。根据药材所含有效成分的性质及制剂所选剂型及成型工艺的特点,还可以选用絮凝沉淀法、膜分离法、透析法、盐析法、离子交换法、大孔树脂吸附法、聚酰胺吸附法、硅胶吸附层析法,分子蒸馏法、酶解法等分离方法对中药提取液进行分离纯化。