革兰氏染色原理及步骤？

一、革兰氏染色原理及步骤？

革兰氏染色法的步骤包含涂片、干燥、固定、初染、水洗、媒染、水洗、脱色、复染、水洗、干燥观察共11步，应注意把握涂片的薄厚、加热温度，脱色时间及各染液质量。

1.涂片：在灭菌后的载玻片中央滴一滴待检样品，用烧红冷却后的接种环将液体铺匀。

2.干燥：载玻片置于酒精灯上加热至水分蒸发。

3.固定：载玻片在酒精灯火焰上快速过2~3次，用2~3秒后待冷却。

4.初染：滴加1~2滴草酸氨结晶紫染液，染色时间约一分钟。

5.水洗：用小水流冲洗载玻片，冲洗至水呈无色。

6.媒染：滴适量革兰氏染液，染色时间约一分钟。

7.水洗：同步骤5。

8.脱色：在载玻片上滴加95％乙醇，至流下乙醇不呈紫色，大约用时半分钟后水洗。

9.复染：滴加1~2滴沙黄染液，染色时间约一分钟。

10.水洗：同步骤5。

11.干燥、观察：待标本片干燥后观察，紫色为革兰氏阳性菌，红色为革兰氏阴性菌。

应注意涂片时应薄而均匀，不宜过大；干燥时勿紧靠火焰，控制加热时间，防止标本烤枯；固定时，加热温度不可过高；脱色的时间应该根据标本的种类及涂片的薄厚程度进行适当调整，不可机械性的按照统一时间操作；应定期检查使用的染液质量，以免发生误差。

二、简述革兰氏染色的原理？

革兰氏染色法的原理是通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密，故遇乙醇脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故乙醇处理不会出现缝隙。

因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差。

在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过乙醇脱色后仍呈无色，再经沙黄等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。

扩展资料：

一、方法概述

细菌先经碱性染料结晶紫染色，而经碘液媒染后，用酒精脱色，在一定条件下有的细菌紫色不被脱去，有的可被脱去，因此可把细菌分为两大类，前者叫做革兰氏阳性菌（G+），后者为革兰氏阴性菌（G－）。

为观察方便，脱色后再用一种红色染料如碱性蕃红、稀释复红等进行复染。阳性菌仍带紫色，阴性菌则被染上红色。有芽胞的杆菌和绝大多数的球菌，以及所有的放线菌和真菌都呈革兰氏正反应；弧菌，螺旋体和大多数致病性的无芽胞杆菌都呈现负反应。

二、常见种类

常见的革兰氏阳性菌有：葡萄球菌（Staphylococcus）、链球菌(Streptococcus)、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等。

常见的革兰氏阴性菌有痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、绿脓杆菌、百日咳杆菌及霍乱弧菌等。

三、革兰氏染色的步骤和原理？

原理：革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G-）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G-菌，是因为一般认为革兰氏染色是基于细菌细胞壁特殊化学组分进行染色的。

步骤：

(一)涂片固定

在干净的载玻片中央滴加一滴蒸馏水，用接种环进行无菌操作，挑取培养物少许，置载玻片的水滴中，与水混合做成菌悬液并涂布成直径约1cm的薄层。

(二)染色

在固定过的涂片菌膜上滴加草酸铵结晶紫染液，染色液应完全覆盖整个菌膜，染色1min。

(三)水洗

染色到一定的时间，拿住玻片使之成450角，用细小的水流把多余的染料冲洗掉，被菌体吸附的染料则保留。

(四)媒染

加碘液覆盖涂面染1 min。在媒染处理时，媒染剂与染料形成不溶性的化合物，可增加染料和细菌的亲和力。

(五)水洗，用吸水纸吸去水分

用细小的水流缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。

(六)脱色

加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色， 20 s~30 s后再进行水洗，吸去水分。

(七)复染

蕃红染色液染色10 s后， 自来水冲洗。

(八)干燥，镜检

染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。

扩展资料

标本干燥后即进行固定，固定的目的有三个：

(1)杀死微生物，固定细胞结构。

(2)保证菌体能更牢固的粘附在载玻片上，防止标本水洗时被水冲洗掉。

(3)改变染料对细胞的通透性，因为死的原生质比活的原生质易于染色。

四、革兰氏染色颜色？

革兰氏染色法（Gramstain）不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。

细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。

五、革兰氏染色保存条件？

只要你的保存条件是　阴凉　避光　干燥的话　　应该能保存１－２年

六、什么叫革兰氏染色》？

革兰氏染色，是指细菌学中广泛使用的一种重要的鉴别染色法，属于复染法。这种染色法是由丹麦医生革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷伯肺炎菌。革兰染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难区别。

经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。

七、革兰氏染色基础是？

革兰染色法的基础一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤。未经染色的细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难区别。

经染色后，阳性菌呈紫色，阴性菌呈红色，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，从而用以分类鉴定。染色原理：通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细菌细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，再用95%乙醇脱色。

八、革兰氏染色的现象？

革兰氏染色是一种染色方法，不同的细菌染色会有所不同表现，有的细菌染色之后呈现一种红色的表现，被称为革兰氏染色阳性细菌;有的则呈现为蓝紫色，被称为革兰氏染色阴性细菌。

除此之外还要看细菌的形状，如果是球菌的话，呈现为球状;如果是杆菌的话，呈现为短杆状。临床上根据细菌的形状及革兰氏染色情况，把细菌进行大致的分类，如革兰氏染色阳性球菌、革兰氏染色阴性杆菌等。

九、什么是革兰氏染色？

革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法：这一染色方法由丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明，最初是用来鉴别肺炎球菌与克雷白氏肺炎菌之间的关系，后推广为鉴别细菌种类的重要特性之一，对由细菌感染引起的疾病的临床诊断及治疗有着广泛用途。

十、革兰氏染色应用范围？

革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。 未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。

染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。