shrna和sirna工作原理？

一、shrna和sirna工作原理？

1、siRNA合成：原理：在RNAi效应阶段，siRNA双链结合一个核酶复合物从而形成所谓RNA诱导沉默复合物（RNA-induced silencing complex, RISC）。激活的RISC通过碱基配对定位到同源mRNA转录本上，并在距离siRNA3’端12个碱基的位置切割mRNA。

化学合成的siRNA具有操作简便、转染效率高、对细胞的或者组织的毒副作用小、可大规模制备等优点，特别适用于基因靶位点不确定情况下，进行siRNA有效片段的筛选。

shRNA干扰载体构建：短发卡RNA (shRNA) 是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA (siRNA, 19-21个核苷酸的RNA 双链)的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA (shRNA)序列并将其克隆到特定载体上。

二、sirna技术原理及优缺点？

sirna技术原理:是通过碱基互补原理，干扰基因的解旋、复制、转录、mRNA的剪接加工乃至输出和翻译等各个环节，从而调节细胞的生长、分化等

sirna技术具有明显的优点：

（1）具有极高的特异性；

（2）反义核酸是针对已知序列的靶基因设计合成的，由于靶基因序列已知，反义核酸仅有15-30个碱基，结构简单，容易设计和体外大量合成。

（3）反义核酸进入细胞内与细胞周期无关，既可进入增殖期细胞又可进入非增殖期细胞。

（4）反义寡核苷酸不含病毒序列，不会产生免疫反应，也不会整合入宿主染色体内

三、sirna退火步骤？

载体表达siRNA的基本步骤

(1) 合成模板

合成编码siRNA的DNA模板的两条单链，模板链后面接有RNA PolyII聚合酶转录中止位点，同时两端分别设计BamH I和Hind II 酶切位点，可以克隆到pSilencer2. 1-U6载体多克隆位点的BamH I和Hind II 酶切位点之间。

(2)合成编码siRNA的DNA双链退火按照下列配制反应体系。

编码siRNA的DNA链12μgddH2O45μL编码siRNA的DNA链22μg总体积50μL5mol/L NaCl1μL

95℃，5min,缓慢退火，使DNA单链退火得到siRNA的DNA双链模板。

酶切表达siRNA载体

载体2μgHind Ⅲ1μL10 Xbuffer3μLddH2O23μLBamH Ⅰ1μL总体积30μL

37℃，2-3h,利用试剂盒胶回收。

连接

T4DNA连接酶5U10 X 连接酶Buffer1μL线性化载体2μL加水补足10μL退火后编码 siRNA的DNA2μL

选择载体和编码siRNA DNA的最佳比例，利用T4连接酶16℃连接4h或过夜。

(5)转化

①将100μL感受态细胞于冰上解冻。②取5μL连接产物加人到感受态细胞中，轻轻旋转几次以混匀内容物，在冰上放置30min。③将管放人预加温到42℃的水浴中，热激90s。快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却1-2min。④每管中加700μL LB培养基，37℃ 振荡培养1h，进行复苏。⑤室温3000r/min离心5min,弃去上清后，用剩余100μL培养基重悬细胞并涂布到含抗性的LB琼脂平板表面。注意:细胞用量应根据连接效率和感受态细胞的效率进行调整。⑥将平板置于室温直至液体被吸收。⑦倒置平皿，于37℃培养，12-16h后可出现菌落。

(6)PCR鉴定和测序鉴定

在插人编码shRNA的DNA双链模板两侧设计鉴定PCR引物，扩增片段在100-200bp之间，并可利用载体上的引物进行测序鉴定。

(7)转染细胞

载体可用常用的转染方法进行细胞转染。按照上述体外合成siRNA的方法进行转染。

(8)检测RNA干扰效率

可以在蛋白水平或mRNA水平检测RNA干扰效率。一般情况下，蛋白质的表达变化与mRNA水平的表达变化一.致，也有少数情况下mRNA表达水平变化不及蛋白质表达下降明显。为检测蛋白质的表达情况，可以使用Western Blot。为检测mRNA表达情况，可以使用逆转录和实时定量PCR。

(9) 筛选稳定表达siRNA的克隆

在转染细胞1-3d后，利用载体携带的筛选标记如G418或puromycin进行筛选，杀死不含有siRNA表达载体的细胞，存活下来的是表达siRNA的细胞。

四、雷达干扰及反干扰原理？

雷达反干扰是为降低或消除敌方电子干扰对己方雷达使用效能的影响而采取的措施和行动。

包括技术反干扰措施和战术反干扰措施。技术反干扰措施主要有:扩展雷达频段、快速变频、提高有效辐射功率、降低天线副瓣电平、防止接收机过载,采用抗干扰能力强的新雷达体制等。战术反干扰措施主要有:合理配置雷达网,与其他探测手段综合运用,跟踪并摧毁干扰源等。实际运用中,一部雷达通常采用多种反干扰措施。

五、倍频干扰原理？

在接收端一般会有一个谐振电路,频率与发射的频率相同,这样,这一频率的信号可以通过,其它的信号会被衰减, 但是倍频信号也可以通过谐振电路,这些信号如果同时到达,可能会在混频的时候进行加减,造成信号改变。

以前的黑白电视机因为室外天线方向不对造成重影,就是这个原因造成的。

无线信号是用电磁波发射的,当另一个信号强到一定程度后,如果同时收到两个信号,接收机会选强的信号,而忽略了原来的信号 (举个例子,在打雷的时候,收音机会收到沙沙声,就是因为打雷的电波改变了收音机信号造成的。

六、电路干扰原理？

1.外部高电压、电源通过绝缘漏电而干扰电子线路、设备或系统。

2.外部大功率的设备在空间产生很强的磁场,通过互感耦合干扰电子线路、设备或系统。

3.空间电磁对电子线路或系统产生的干扰。

4.工作环境温度不稳定,引起电子线路、设备或系统内部元器件参数改变造成的干扰。

七、高频干扰原理？

高频干扰的原理为：高频率的电磁波不需要导线，通过大地和空间的电容可以传送电波，频率高则会产生干扰，高、中压变电站内开关分、合操作时会产生高频阻尼振荡波，即高频干扰。

解决高频干扰的方法有：

通过屏蔽抑制辐射干扰。通过磁环抑制传导干扰。通过穿心电容抑制传导干扰。通过低通滤波器抑制高频干扰。

八、微波干扰原理？

利用强能量的微波源向目标定向发射高功率脉冲调制的高功率微波极窄波束能量，用来干扰或毁坏目标上的电子设备以及杀伤作战人员，是一种定向能武器装备。

高功率微波武器的辐射频率为1~30千赫，输出峰值功率一般在1千兆瓦以上，个别的可达10千兆瓦。高功率微波武器的主要攻击目标是雷达、通信系统、计算机、制导系统以及车辆、舰船、飞机和导弹中的电子元器件，像激光武器一样，也具备硬杀伤和软杀伤两种功能。当微波能量很强或极强时，可作为硬杀伤武器装备，直接摧毁敌方武器装备，致死敌方作战人员。当微波能量较弱时，可作为软杀伤武器或非致命武器使用，干扰电子设备，使作战人员失去战斗力。

九、电场干扰原理？

　　一般电子线路都是由电阻器、电容器、电感器、变压器、有源器件和导线组成，当电路中有电压存在的时候，在所有带电的元器件周围都会产生电场，当电路中有电流流过的时候，在所有载流体的周围都存在磁场。

电容器是电场最集中的元件，流过电容器的电流是位移电流，这个位移电流是由于电容器的两个极板带电，并在两个极板之间产生电场，通过电场感应，两个极板会产生充放电，形成位移电流。实际上电容器回路中的电流并没有真正流过电容器，而只是对电容器进行充放电。当电容器的两个极板张开时，可以把两个极板看成是一组电场辐射天线，此时在两个极板之间的电路都会对极板之间的电场产生感应。在两极板之间的电路不管是闭合回路，或者是开路，在与电场方向一致的导体中都会产生位移电流（当电场的方向不断改变时），即电流一会儿向前跑，一会儿向后跑。

　　电场强度的定义是电位梯度，即两点之间的电位差与距离之比。一根数米长的导线，当其流过数安培的电流时，其两端电压最多也只有零点几伏，即几十毫伏/米的电场强度，就可以在导体内产生数安培的电流，可见电场作用效力之大，其干扰能力之强。

　　电感器和变压器是磁场最集中的元件，流过变压器次级线圈的电流是感应电流，这个感应电流是因为变压器初级线圈中有电流流过时，产生磁感应而产生的。在电感器和变压器周边的电路，都可看成是一个变压器的感应线圈，当电感器和变压器漏感产生的磁力线穿过某个电路时，此电路作为变压器的“次级线圈”就会产生感应电流。两个相邻回路的电路，也同样可以把其中的一个回路看成是变压器的“初级线圈”，而另一个回路可以看成是变压器的“次级线圈”，因此两个相邻回路同样产生电磁感应，即互相产生干扰。

十、gps干扰原理？

GPS （Global Positioning System） 干扰原理是基于 GPS 信号被其他信号干扰造成的原理。GPS 接收器接收到的信号必须与外部干扰信号分离，以便提取 GPS 信号。干扰可以是由于各种因素，如电磁干扰、电离层干扰、太阳阵风、等等，导致的。

常见的 GPS 干扰包括：

噪声干扰：造成的原因包括电磁干扰、电磁噪声以及接收机自身的噪声。

遮挡干扰：当 GPS 信号穿过建筑物、地形等物体时，信号被遮挡，从而影响接收。

伪基站干扰：伪基站是模拟 GPS 信号的装置，以干扰 GPS 接收器。

软件干扰：这是由软件程序导致的干扰，例如仿冒 GPS 信号、恶意软件等。