wb实验的原理和步骤？

一、wb实验的原理和步骤？

WB实验的基本原理：

蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。

与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

三、WB实验步骤

(一)试剂准备

(二)蛋白样品制备

(三) 蛋白含量的测定

(四)SDS-PAGE电泳

(五)转膜

(六)免疫反应

(七)化学发光，显影，定影

(八)凝胶图象分析

二、wb实验步骤及原理？

WB实验的基本原理：

蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。

与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

三、WB实验步骤

(一)试剂准备

(二)蛋白样品制备

(三) 蛋白含量的测定

(四)SDS-PAGE电泳

(五)转膜

(六)免疫反应

(七)化学发光，显影，定影

(八)凝胶图象分析

三、wb详细原理及步骤？

一、WB实验的基本原理：

　　蛋白质免疫印迹(Western Blot)是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测的方法。一个基因表达终极结果是产生相应的蛋白质(或酶)。因此检测蛋白质是测定基因表达的主要标志，检测蛋白质的方法很多，除 ELISA 法外，也可用与检测 DNA 和 RNA 相类似的吸印方法。

　　与Southern或Northern杂交方法类似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，“探针”是抗体，“显色”用标记的二抗。

　　经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体(例如硝酸纤维素薄膜)上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。

四、pcr实验原理和步骤？

一、基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。

在实验中发现，DNA在高温时也可以发生变性解链，当温度降低后又可以复性成为双链。因此，通过温度变化控制DNA的变性和复性，加入设计引物，DNA聚合酶、dNTP就可以完成特定基因的体外复制。

二、PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：

1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。

2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

3、引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

重复循环变性--退火--延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”，而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

五、chip实验原理和步骤？

原理：活细胞中固定蛋白质-DNA复合物，并用酶切或超声打断的方式将其随机切断为200~1000bp的小片段，然后通过特异的抗体沉淀蛋白质-DNA复合物，特异性地富集目的蛋白结合的DNA片段，通过对目的片断的纯化与检测，从而获得蛋白质与DNA相互作用的信息。

步骤：a.甲醛处理细胞，交联固定:靶蛋白-DNA复合物；

b.细胞裂解及超声打断：200~1000bp染色质；

c.抗体与靶蛋白-DNA 复合物相互结合:抗体-靶蛋白-DNA复合物；

d.Protein A/G结合抗体-靶蛋白-DNA 复合物:

e.沉淀复合物， 并清洗，除去非特异性结合蛋白；

f.洗脱，得到富集的靶蛋白-DNA 复合物

g.解交联，纯化富集的DNA-片断。

六、彩虹雨实验步骤和原理？

剃须泡沫由大量小气泡组成，密度低于水，会浮在水上面的。滴入色素后，色素迅速渗过泡沫到达水面，色素的密度比水大，所以当色素到水面时，就能以较快的速度向密度更低的水中扩散，形成彩虹雨的现象。

首先稀释食用色素。小杯子中装少量清水，往杯里滴入食用色素，搅拌均匀。然后在玻璃杯里倒入2/3的清水，在杯顶挤上大量剃须泡沫，做出云朵的形状。最后用滴管依次吸取有色液体滴到云朵上，看它变成彩虹雨慢慢落在杯子里。

七、水果电池实验原理和步骤？

水果电池实验的原理主要是两种金属片的电化学活性不同，其中更活泼的那边的金属片能置换出水果中的酸性物质的氢离子，产生正电荷，整个系统需要保持稳定。在组成原电池的情况下，自由电子从回路中保持系统的稳定，电流大小直接和果酸浓度相关，是一个定量关系。

实验步骤如下：

1. 准备工具和材料，包括水果、铜片、锌片、电线、电表。

2. 选择大小、形状基本相同的水果若干个，将它们分组，分成“一般甜”、“较甜”、“很甜”三组。

3. 将同一组的水果处理，分成三类：完整的水果、切掉一部分的水果。

4. 将灵敏电流计、开关、导线串联，并将两个端点上接上电极。

5. 按照下表顺序，分别进行实验。将两个电极插入实验水果中。

6. 看是否有电。

在实际操作中，还可以将柠檬、铜币、螺丝钉或铝片等材料按照一定的顺序排列，形成原电池。然后将导线连接到铜币或螺丝钉上，形成回路。将低电压驱动的发光二极管连接到回路中，观察电流大小和发光效果。可以使用黑色不透明的胶卷壳遮光，方便观察。

八、pcr实验原理和基本步骤？

基本原理：PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。DNA的半保留复制是生物进化和传代的重要途径。双链DNA在多种酶的作用下可以变性解旋成单链，在DNA聚合酶的参与下，根据碱基互补配对原则复制成同样的两分子拷贝。

PCR由变性--退火--延伸三个基本反应步骤构成：

1、模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备。

2、模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合。

3、引物的延伸：DNA模板--引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。

九、灭火的原理实验步骤？

火是化学燃烧反应，通常是空气中的氧气和某些燃料如木头或汽油之间发生的反应所引起的。当然，木头和汽油不会仅仅因为与氧气接触液枣轿就自发燃烧，燃料只有被加热到着火点温度时，燃烧反应才会产生。

十、托里拆利实验的原理和步骤？

原理是大气压支持76厘米高水银柱。步骤是在长约一米的细均匀玻璃管内倒满水银，为把管内的空气排出，在管内放一细铁丝。然后用手指堵住玻璃管的一端，慢慢把玻璃管竖直到放在水银槽中。