分离原理:
C18色谱柱是一款应用非常广泛的反相色谱柱,因为它对化合物分离的作用力单一,所以我们可以在出峰时间上判断化合物的极性大小。
C18在反相条件下基本上适合绝大部分物质。通过改变硅胶孔径,材质或者修饰C18(嵌入亲水基团,侧链屏蔽,在硅胶表面带电,杂化等)或者改变碳载量,在方法上改进(衍生),让它在小分子化合物的分离都有很大的优势。大极性,中等极性,小极性,都是可以实现分离。
GC主要是利用物质的沸点、极性及吸附性质的差异来实现混合物的分离,待分析样品在汽化室汽化后被惰性气体(即载气,也叫流动相)带入色谱柱,柱内含有液体或固体固定相,由于样品中各组分的沸点、极性或吸附性能不同,每种组分都倾向于在流动相和固定相之间形成分配或吸附平衡。
但由于载气是流动的,这种平衡实际上很难建立起来。
也正是由于载气的流动,使样品组分在运动中进行反复多次的分配或吸附/解吸附,结果是在载气中浓度大的组分先流出色谱柱,而在固定相中分配浓度大的组分后流出。
当组分流出色谱柱后,立即进入检测器。
检测器能够将样品组分的与否转变为电信号,而电信号的大小与被测组分的量或浓度成正比。
当将这些信号放大并记录下来时,就是气相色谱图了。说的形象点,就像许多人在一条跑道,总有跑的快慢之分,快的就先出来,慢的就后到。
色谱管为内径均匀、下端缩口的硬质玻璃管,下端用棉花或玻璃纤维塞住,管内装入吸附剂。吸附剂的颗粒应尽可能保持大小均匀,以保证良好的分离效果。除另有规定外,通常多采用直径为0.07~0.15mm的颗粒。色谱柱的大小,吸附剂的品种和用量,以及洗脱时的流速,均按各品种项下的规定。利用混合物中不同组分在流动相和固定相中溶解和解析能力不同打到分离效果。
c18柱色谱原理是采用液相C18柱的性能指标进行色谱分析。C18 色谱柱通常在高压下运行。如果管路连接不紧,将 会导致有机溶剂和注入样品的泄漏,从而对操作人员的健康产生影响。一旦发生泄漏,应佩戴适当的手套进行处理。
另 外当打开色谱柱时还应采取适当的保护措施,以防止微小的 硅胶颗粒进入呼吸道。
xamide色谱柱是凝胶色谱柱,c18是反相色谱柱。填充物不一样。
正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强。
正相色谱 正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica)以及其他具有极性官能团胺基团,如(NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料。
由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他极性基团极性较强,因此,分离的次序是依据样品中各组分的极性大小,即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如正已烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等。
凝胶色谱法分离原理:
一个含有各种分子的样品溶液缓慢地流经凝胶色谱柱时,各分子在柱内同时进行着两种不同的运动:垂直向下的移动和无定向的扩散运动。大分子物质由于直径较大,不易进入凝胶颗粒的微孔,而只能分布颗粒之间,所以在洗脱时向下移动的速度较快。
C18,表示其固定相是,键合到硅胶上的烷烃是18个碳的。
C18色谱柱是最常用、每个实验室必备的通用型色谱柱。填料是硅胶基质上键合十八烷基,有较高的碳含量和较好的疏水性,适用于大多数化合物,包括非极性、极性小分子及一些多肽及蛋白质。随着每家色谱柱制造商的研发,C18柱的类型还在不断增加。适用pH范围由原来的2~8,发展到现在1~14,与纯水相的兼容性越来越好,某些色谱柱即使长时间使用100%水相,也不会发生填料疏水塌陷。
XBridge Amide色谱柱使用化学性质稳定的三键键合的酰胺基键合相,为HILIC分离创造了稳定性和通用性的新维度。
除了对强极性化合物的保留能力增强之外,XBridge Amide色谱柱还用样适用于糖(多糖)的分析。
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