凝胶色谱法的原理？

一、凝胶色谱法的原理？

以多孔凝胶（如葡萄糖，琼脂糖，硅胶，聚丙烯酰胺等）作固定相，依据样品分子量大小达到分离目的。

大分子不进入凝胶孔洞，沿多孔凝胶胶粒间隙流出，先被洗脱；小分子进入大部分凝胶孔洞，在柱中被强滞留，后被洗脱。根据样品性质分类： 凝胶过滤（GFC）—用于分析水溶性样品，如多肽、蛋白、生物酶、寡聚核苷酸、多聚核苷酸、多糖。凝胶渗透（GPC）—用于分析脂溶性样品，如测定高聚物的分子量。

二、tlc薄层色谱法原理？

TLC（薄层色谱）法是一种将化学物质分离和鉴定的技术。被分离的混合物被涂在薄层板上，然后将板放入溶剂中，溶剂会在板上移动，这样不同的化合物将在板上移动不同的距离。通过比较样品和标准物质的移动距离，可以确定样品中的化合物。这种方法使用简单，速度快，可以分离和鉴定大量的化合物，并且只需要少量的样品。

三、高效液相色谱法原理？

你好，高效液相色谱法是一种分离和定量分析化合物的方法。它基于物质在流动相中的不同亲和性，利用固定相对物质进行分离。其原理如下：

1. 流动相：高效液相色谱法中的流动相通常是有机溶剂和水的混合物。流动相的选择取决于样品的性质和分析要求。

2. 固定相：高效液相色谱法中的固定相是一种微小的颗粒，通常是硅胶、聚合物或碳等。这些颗粒的表面被特殊化学物质覆盖，可以与待分离的物质相互作用。

3. 样品进样：待分离的样品通过进样器进入高效液相色谱柱。通常使用自动进样器或手动进样器。

4. 分离过程：样品进入色谱柱后，被固定相吸附和分离。不同物质在流动相中的亲和性不同，所以会以不同的速度通过色谱柱，最终分离出来。

5. 检测：分离出来的不同化合物可以通过不同的检测方法进行检测，如紫外线检测器、荧光检测器、电化学检测器等。

6. 数据处理：通过对检测结果进行处理和分析，可以确定样品中不同化合物的含量和相对含量。

高效液相色谱法具有高分离效率、高分辨率、操作简便、灵敏度高等优点，广泛应用于制药、化工、食品、环保等领域的化学分析和质量控制。

四、气相色谱法原理？

气相色谱法的原理是通过将待测物质在高温下气化，然后通过气态移动相向色谱柱中运动，通过在移动相与固定相间的分配系数不同，使待测物质能够在色谱柱内快速分离出来 实际操作中，待测样品通过进样口进入色谱柱，在色谱柱内与载气一起向前移动，在由多个填充组成的色谱柱中，根据待测物质在填充材料中的亲和性不同，不同的物质会在不同的时间点分离出来通过检测样品在色谱柱中分离出来的不同物质的信号，可以实现定量和定性分析 气相色谱法已经成为了一种非常常见的分析方法，主要应用于石油化工、医药、食品等领域的定性和定量分析，因为其具有高灵敏度、高分辨率、分离效率好、操作简便等优点

五、硅胶色谱法分离原理是？

硅胶色谱法分离原理：硅胶色谱法是从混合物中分离组分的方法，能够分离物化性能差别很小的化合物。并且兼具有分离和分析两种功能，能排除组分间的相互干扰，并能将组分逐一进行定性、定量分析，而且还可制备纯组分。

硅胶是一种多孔性物质, 粒度5~10μm,通过-O-Si(-O-)-O-Si(-O-)-O-结合而具有三维结构,表面具有硅羟基。作吸附剂的硅胶需经加热处理,除掉其表面吸附水,使之活化。按其孔径分布分为表面多孔和全多孔两类。硅胶既是吸附色谱最常用的固定相，也是分配色谱、离子色谱等色谱固定相的常用基质。

六、分子排阻色谱法原理？

排阻色谱法（SEC）亦称空间排阻色谱或凝胶渗透色谱法。是一种根据试样分子的尺寸进行分离的色谱技术。

排阻色谱的分离机理是立体排阻，样品组分与固定相之间不存在相互作用的现象。色谱柱的填料是凝胶，它是一种表面惰性，含有许多不同尺寸的孔穴或立体网状物质。

凝胶的孔穴大小与被分离的试样大小相当。仅允许直径小于孔开度的组分分子进入，这些孔对于流动相分子来说是相当大的，以致流动相分子可以自由地扩散出入

七、气相色谱法工作原理？

气相色谱：利用色谱柱先将混合物分离，然后利用检测器依次检测已分离出来的组分。

色谱柱的直径为数毫米，其中填充有固体吸附剂或液体溶剂，所填充的吸附剂或溶剂称为固定相。与固定相相对应的还有一个流动相。流动相是一种与样品和固定相都不发生反应的气体，一般为氮或氢气。待分析的样品在色谱柱顶端注入流动相，流动相带着样品进入色谱柱，故流动相又称为载气。载气在分析过程中是连续地以一定流速流过色谱柱的；而样品则只是一次一次地注入，每注入一次得到一次分析结果。

样品在色谱柱中得以分离是基于热力学性质的差异。固定相与样品中的各组分具有不同的亲合力。当载气带着样品连续地通过色谱柱时，亲合力大的组分在色谱柱中移动速度慢，因为亲合力大意味着固定相拉住它的力量大。亲合力小的则移动快。4根柱管实际上是一根，只是用来表示样品中各组分在不同瞬间的状态。

样品是由A、B、C3个组分组成的混合物。在载气刚将它们带入色谱柱时，三者是完全混合的。经过一定时间，即载气带着它们在柱中走过一段距离后，三者开始分离。再继续前进，三者便分离开。固定相对它们的亲合力是A、B、C，故移动速度是C、B、A。走在最前面的组分C首先进入紧接在色谱柱后的检测器，而后B和A也依次进入检测器。

检测器对每个进入的组分都给出一个相应的信号。将从样品注入载气为计时起点，到各组分经分离后依次进入检测器，检测器给出对应于各组分的最大信号所经历的时间称为各组分的保留时间tr。实践证明，在条件一定时，不同组分的保留时间tr也是一定的。因此，反过来可以从保留时间推断出该组分是何种物质。故保留时间就可以作为色谱仪器实现定性分析的依据。

检测器对每个组分所给出的信号，在记录仪上表现为一个个的峰，称为色谱峰。色谱峰上的极大值是定性分析的依据，而色谱峰所包罗的面积则取决于对应组分的含量，故峰面积是定量分析的依据。一个混合物样品注入后，由记录仪记录得到的曲线，称为色谱图。分析色谱图就可以得到定性分析和定量分析结果。

载气由载气钢瓶提供，经过载气流量调节阀稳流和转子流量计检测流量后到样品气化室。样品气化室有加圈，以使液体样品气化。如果待分析样品是气体，气化室便不必加热。气化室本身就是进样室，样品可以经它注射加入载气。载气从进样口带着注入的样品进入色谱柱，经分离后依次进入检测器而后放空。检测器给出的信号经放大后由记录仪记录下样品的色谱图。

气相色谱仪是一种多组份混合物的分离、分析工具，它是以气体为流动相，采用冲洗法的柱色谱技术。当多组份的分析物质进入到色谱柱时，由于各组分在色谱柱中的气相和固定液液相间的分配系数不同，因此各组份在色谱柱的运行速度也就不同，经过一定的柱长后，顺序离开色谱柱进入检测器，经检测后转换为电信号送至数据处理工作站，从而完成了对被测物质的定性定量分析。

八、体积排除色谱法的原理？

通常用于分子量大于2000的样品的分离。SEC方法最广泛的用途是测定聚合物的分子量分布，对某些大分子样品如蛋白质、核酸等，也是种很有效的分离纯化手段。SEC方法能简便快速地分离样品中分子量相差较大的组分，因而适合于未知样品的初步探索性分离，无需进行复杂实验就能较为全面地了解样品组成分布的概况。

SEC方法按其流动相体系通常分为两大类，即适合于分离水溶性样品的凝胶过滤色谱（GFC）和适合于分离油溶性样品的凝胶滲透色谱（GPC），两种方法的分离原理虽然相同但采用的固定相、分离对象和使用技术完全不同。

九、葡萄糖色谱法原理？

利用样品混合物中各组分理、化性质的差异，各组分程度不同的分配到互不相溶的两相中。当两相相对运动时，各组分在两相中反复多次重新分配，结果使混合物得到分离。

两相中，固定不动的一相称固定相；移动的一相称流动相。

分类：

根据流动相分—以气体作流动相—气相色谱——固定相为液体 气-液色谱

固定相为固体 气-固色谱

—以液体作流动相—液相色谱——固定相为液体 液-液色谱

固定相为固体 液-固色谱

—当流动相是在接近它的临界温度和压力下工作的液体时——超临界色谱

根据固定相的附着方式

—固定相装在圆柱管中—柱色谱

—固定相涂敷在玻璃或金属板上—薄膜色谱（平板色谱）

—液体固定相涂在纸上—纸色谱（平板色谱）

根据分离机理

—分配色谱—样品组分的分配系数不同

—吸附色谱— 样品组分对固定相表面吸附力不同

—体积排阻色谱—利用固定相孔径不同，把样品组分按分子大小分开

—离子交换色谱—不同离子与固定相商相反电荷间的作用力大小不同

根据极性

—流动相极性＞固定相极性-反相色谱

—流动相极性＜固定相极性-正相色谱

气相色谱只适合分析较易挥发、且化学性质稳定的有机化合物，而hplc则适合于分析那些用气相色谱难以分析的物质，如挥发性差、极性强、具有生物活性、热稳定性差的物质。所以，hplc的应用范围已经远远超过气相色谱。

一、吸附色谱（adsorption chromatography）

又叫液固色谱法：流动相是液体，固定相是固体。

分离原理：固定相是固体吸附剂，吸附剂是多孔性微粒物质表面有吸附中心。样品组分与流动相竞争吸附中心。各组分的吸附能力不同，使组分在固定相中产生保留时间不同和实现分离。

固定相： 固定相通常是强极性的硅胶、氧化铝、活性炭、聚乙烯、聚酰胺等固体吸附剂。活性硅胶最常用。

流动相： 弱极性有机溶剂或非极性溶剂与极性溶剂的混合物，如正构烷烃（己烷、戊烷、庚烷等）、二氯甲 烷/甲醇、乙酸乙酯/乙腈等。

应用： 对于极性，结构异构体分离和族分离仍是最有效的方法，如农药异构体分离、石油中烷、烯、芳烃的分离。 缺点是容易产生不对称峰和拖尾现象。

十、五大色谱法原理？

液相色谱法按分离机制的不同分为

1.液固色谱法：使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离原理是根据固定相对组分吸附力大小不同而分离。

2.液液色谱法：使用将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的固定相，分离原理是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。

3.离子交换色谱法：固定相是离子交换树脂，常用苯乙烯与二乙烯交联形成的聚合物骨架，在表面未端芳环上接上羧基、磺酸基（称阳离子交换树脂）或季氨基（阴离子交换树脂）。

4.离子对色谱法：又称偶离子色谱法，是液液色谱法的分支。它是根据被测组分离子与离子对试剂离子形成中性的离子对化合物后，在非极性固定相中溶解度增大，从而使其分离效果改善。主要用于分析离子强度大的酸碱物质。

5.排阻色谱法：固定相是有一定孔径的多孔性填料，流动相是可以溶解样品的溶剂。小分子量的化合物可以进入孔中，滞留时间长；大分子量的化合物不能进入孔中，直接随流动相流出。